[发明专利]CARHER1-NKT细胞在制备用于治疗进展期HER1阳性肺癌的制剂中的应用

摘要

本发明公开了CARHER1‑NKT细胞在制备用于治疗进展期HER1阳性肺癌的制剂中的应用，其中，CARHER1‑NKT细胞是由嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ修饰的NKT细胞，嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ包括串联的大鼠生长激素信号肽、HER1ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。采用本发明的CARHER1‑NKT细胞治疗进展期HER1阳性肺癌时，能够有效避免采用现有靶向HER1的药物时引起的耐药性，对肺癌细胞具有一定的特异杀伤活性，且对进展期HER1阳性肺癌患者有一定的治疗效果。

主权项

1.CARHER1‑NKT细胞在制备用于治疗进展期HER1阳性肺癌的制剂中的应用，其特征在于，所述CARHER1‑NKT细胞是由嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ修饰的NKT细胞，其中，所述嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ包括串联的大鼠生长激素信号肽、HER1ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域；所述嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CARHER1‑NKT细胞的制备方法包括：包装携带pWPXL‑HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ的慢病毒，得到病毒浓缩液；利用得到的病毒浓缩液感染NKT细胞，使NKT细胞表达嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ，其中，所述pWPXL‑HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ为含有编码嵌合抗原受体HER1ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ的基因的慢病毒表达载体；所述感染NKT细胞的方法包括：取在75cm²培养瓶中培养的1×10⁷个NKT细胞，弃掉旧的培养液，加入2mL新鲜NKT细胞培养基GT‑T551、200μL病毒浓缩液、2μL 1×10^‑6mg/mL鱼精蛋白，终浓度为500U/mL的重组人白介素2，置于37℃、饱和湿度为5％的CO₂培养箱中感染12小时后，弃培养液；将感染后的细胞转至未经CD3和重组纤维连接蛋白包被的75cm²培养瓶中，加入20mL的NKT细胞培养基GT‑T551，再加入终浓度为500U/mL的重组人白介素2、终浓度为50ng/ml的CD3单克隆抗体和终浓度为50ng/mL的重组人白介素15，于37℃、饱和湿度为5％的CO₂培养箱中培养18h；将上述培养后的NKT细胞用重组人白介素2的终浓度为500U/mL的NKT细胞培养基GT‑T551进行体外诱导，待细胞的密度为85％时将细胞转入细胞培养袋中，隔2天加入重组人白介素2的终浓度为500U/mL、CD3单克隆抗体的终浓度为50ng/ml、重组人白介素15的终浓度为50ng/mL的新鲜NKT细胞培养基GT‑T551进行扩增培养。