[发明专利]一种能同时鉴定巨型球菌、果胶杆菌、乳酸片球菌三种啤酒污染菌的快速检测方法

摘要

本发明公开一种能同时鉴定巨型球菌、果胶杆菌、乳酸片球菌三种啤酒污染菌的快速检测方法。该方法包括啤酒污染菌的培养及DNA模板提取，然后通过采用高通量的多重PCR技术与高分辨率的毛细管电泳分离技术相结合的方式，从而实现对啤酒生产过程快速确定啤酒中是否存在污染菌的检测。本发明相对于目前其他以PCR技术为基础的分子生物学检测手段，能够在一次反应中集成检测3种抗酒花基因极度厌氧菌，节约了检测成本，节省了检测时间，检测时间由原7～14天缩短到8h。

主权项

一种能同时鉴定巨型球菌、果胶杆菌、乳酸片球菌三种啤酒污染菌的快速检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤(1)、啤酒污染菌的培养及DNA模板提取：将检测啤酒样品在厌氧环境中静置过夜富集培养，过滤收集细胞沉淀；然后在细胞沉淀中依次加入50mM EDTA 480ul、10mg/ml溶菌酶120ul，37℃孵育60min，13,000×g离心2min，移去上清液；最后采用试剂盒提取啤酒污染菌的DNA模板；步骤(2)、多重PCR扩增：将多重PCR扩增反应体系振荡混匀后，进行多重PCR扩增,得到扩增产物；所述的多重PCR扩增反应体系为20ul由100nM正向混合引物2ul，100nM反向混合引物2ul，25mM的MgCl₂4ul，5×PCRBuffer 4ul，5U/ul的Taq聚合酶0.7ul，DNA模板1ul，余量的双蒸水组成；其中正向混合引物为SEQ ID NO.1、3、5的混合引物，反向混合引物为SEQ ID NO.2、4、6的混合引物；步骤(3)、对含有上述扩增产物的分离体系进行毛细管电泳分离；步骤(4)、检测鉴定：所述步骤(2)中所得的扩增产物经过毛细管电泳分离时，通过多重基因表达遗传分析系统自动检索、收集样品中荧光信号，判断是否在基因片段长度为161bp、181bp、176bp相应位置处出现特征峰；若在161bp相应位置处出现特征峰，则判断为该检测样品中含有巨型球菌；若在181bp相应位置处出现特征峰，则判断为该检测样品中含有果胶杆菌；若在176bp相应位置处出现特征峰，则判断为该检测样品中含有乳酸片球菌。