[发明专利]一种7-ACA固定化酶LK118的制备及其使用方法

摘要

本发明公开了一种7‑ACA固定化酶的制备及应用工艺，具体来说是一种耐用型7‑ACA固定化酶LK118的制备，及采用LK118酶裂解CPC，制备7‑ACA的工艺方法。本发明的7‑ACA固定化酶LK118，在生产7‑ACA时，能解决原有7‑ACA酰化酶寿命短、应用时CPC残留高、转化率低、产品7‑ACA颜色深等问题，本发明提供了一种耐用型固定化7‑ACA酰化酶的制备，及在7‑ACA中的应用新工艺。

主权项

1.一种利用7‑ACA固定化酶LK118催化CPC制备7‑ACA的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)环氧型载体的制备；将单体和交联剂利用悬浮聚合法，制备大孔吸附树脂环氧型载体；且大孔吸附树脂环氧型载体的环氧值在300μmol/g以上；浊度小于200；孔径大于50nm；(2)环氧型载体的预处理；将步骤(1)所制得的环氧型载体用磷酸缓冲溶液进行处理；(3)CPC‑酰化酶的固定化；将游离型的CPC‑酰化酶加入至磷酸缓冲溶液中溶解，再将步骤(2)处理过的环氧型载体加至溶有CPC‑酰化酶的磷酸盐缓冲液中，在20‑30℃下振荡15‑40h后过滤，用磷酸缓冲溶液进行冲洗，得到固定化的CPC酰化酶，即7‑ACA固定化酶LK118；具体步骤如下：1)将底物CPC浓缩液稀释至效价为25000‑40000U/mL，并将7‑ACA固定化酶LK118，加入至上述CPC浓缩液中，用质量分数为2‑10％的氨水溶液调节上述反应液的pH值为8.2‑8.4，控制温度为10‑15℃，反应40‑100min，直至CPC残留效价为0‑200U/mL，结束反应；2)将步骤1)所得的混合液，通过筛网，分离出产物和固定化酶；3)将步骤2)所得到的产物降温至0‑10℃，用5‑6mol/L的盐酸溶液调pH值至5.0‑5.6，养晶，洗涤，干燥，即得产品7‑ACA。