[发明专利]抗结肠癌黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粉的制备方法

摘要

本发明涉及一种抗结肠癌黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粉的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴菌体发酵：黄绿蜜环菌菌种经液体发酵、离心、减压干燥得黄绿蜜环菌次生代谢产物；⑵液液分配富集：黄绿蜜环菌次生代谢产物经分散、萃取、减压干燥得黄绿蜜环菌次生代谢产物乙酸乙酯萃取部位；⑶大孔树脂柱色谱除杂：黄绿蜜环菌次生代谢产物乙酸乙酯萃取部位溶解后经大孔树脂柱分离、梯度洗脱、减压干燥即得黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粗粉；⑷硅胶柱层析分离：黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粗粉溶解后，经硅胶柱色谱分离、洗脱，并经薄层色谱检测后减压干燥，即得呈黄色粉末状的黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粉。本发明工艺简单、易规模化实施、质量稳定可控。

主权项

1.抗结肠癌黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粉的制备方法，包括以下步骤：⑴菌体发酵：将黄绿蜜环菌菌种用PDA培养基进行液体发酵2~4个周期，每个周期7~20天，合并培养液，该培养液经离心后，得到上清液；所述上清液经减压干燥即得黄绿蜜环菌次生代谢产物；⑵液液分配富集：所述黄绿蜜环菌次生代谢产物用其质量10~20倍的分析纯水分散，得到分散液；该分散液用10~20倍体积的乙酸乙酯萃取3次，合并得到乙酸乙酯萃取液；所述乙酸乙酯萃取液经减压干燥得黄绿蜜环菌次生代谢产物乙酸乙酯萃取部位；⑶大孔树脂柱色谱除杂：在所述黄绿蜜环菌次生代谢产物乙酸乙酯萃取部位中加入其质量5~10倍的水进行溶解，然后经大孔树脂柱分离，并依次分别以水、体积分数为75%的乙醇溶液按5~10倍的柱体积进行梯度洗脱，收集75%乙醇洗脱物；该75%乙醇洗脱物经减压干燥即得黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粗粉；⑷硅胶柱层析分离：在所述黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粗粉中加入其质量3~5倍体积分数为90~100%的甲醇溶液进行溶解，经硅胶柱色谱分离，用5~10倍柱体积的氯仿‑甲醇混合溶剂洗脱，按每份100~300 mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿、甲醇按5：5的体积比混合而成的混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.1~0.8的馏分；所述Rf值为0.1~0.8的馏分经减压干燥，即得呈黄色粉末状的黄绿蜜环菌次生代谢产物浸膏粉。