[发明专利]一种利用真菌发酵制备漆酶的方法

摘要

本发明涉及一种利用真菌发酵制备漆酶的方法。本发明以麸皮、茶叶、蛋白胨、KH₂PO₄                             MgSO₄·7H₂O、MnSO₄·5H₂O、CuSO₄·5H₂O为培养基的主原料，接入冠突散囊菌孢子悬浮液，在温度26～28℃,转速120r/min的条件下摇瓶培养3～4天后获得粗酶液；粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素阴离子交换柱层析和葡聚糖G-150凝胶层析，即得到纯化的漆酶。采用本发明所述的方法，优化了漆酶生产的发酵培养条件,在优化的培养条件下,漆酶的纯化倍数达到 8.98，回收率为24.88%，酶活达到2413U/L。

主权项

 一种利用真菌发酵制备漆酶的方法，其特征在于1）以终体积为1 L的发酵培养基水溶液计，其各组份为：麸皮                30.0～35.0 g茶叶                     6～10 g蛋白胨                  2.5～4 gKH₂PO₄                                  2.0～3.0 gMgSO₄·7H₂O            0.2～0.5 gMnSO₄·5H₂O          0.45～0.55 gCuSO₄·5H₂O          0.01～0.02 g2）具体制备步骤:(1) 按以上发酵培养基配方配制培养基,在每个250 mL三角瓶中装入发酵培养基，液量为60 mL,按常规方法灭菌；(2) 在每个三角瓶中接入冠突散囊菌孢子悬浮液2 mL，温度26～28 ℃, 转速120 r/min的条件下摇瓶培养3～4天后,取发酵液经纱布过滤、离心获得上清液即为粗酶液；(3) 粗酶液依次经过硫酸铵分级沉淀、DEAE‑纤维素阴离子交换柱层析和葡聚糖G‑150凝胶层析，即得到分离纯化的漆酶。