[发明专利]可基因编码的全蛋白质索烃的制备方法

摘要

本发明公开了一种可基因编码的全蛋白质索烃的制备方法，利用蛋白互锁结构单元使蛋白质单体分子之间发生相互缠绕，并利用类似于谍标签‑谍捕手偶联反应对的蛋白质反应对使蛋白质单体分子发生环化形成索烃，首先构建包含所述蛋白质反应对和蛋白互锁结构单元的重组蛋白对应的编码基因并引入载体质粒中，然后在细胞中进行表达，纯化表达蛋白，得到蛋白质索烃。本发明利用基因编码的形式，在细胞体内较为高效地获得具有索烃结构的蛋白质，能够最大程度地降低蛋白质索烃制备的难度，获得功能稳定的活性蛋白质。

主权项

1.一种蛋白质索烃的制备方法，包括以下步骤：1)设计蛋白质索烃单体序列，该蛋白质索烃单体至少包括由两条多肽片段组成的蛋白质反应对和位于该两条多肽片段之间的蛋白互锁结构单元，其中所述蛋白互锁结构单元使蛋白质索烃单体发生分子之间的相互缠绕，所述蛋白质反应对使蛋白质索烃单体发生环化形成索烃；具体的，所述蛋白质索烃单体基于如下基本结构(a)或(b)：(a)从N端至C端依次为谍标签、肿瘤抑制因子p53寡聚化结构域、谍捕手；(b)从N端至C端依次为谍捕手、肿瘤抑制因子p53寡聚化结构域、谍标签；在(a)或(b)结构基础上，在谍标签与肿瘤抑制因子p53寡聚化结构域之间，和/或，在谍捕手与肿瘤抑制因子p53寡聚化结构域之间，和/或，在(a)或(b)结构的N端和/或C端加入任意的一个或者多个相同或不同的功能蛋白结构域；2)构建蛋白质索烃单体对应的编码基因并引入载体质粒中；3)在细胞中表达步骤2)构建的基因；4)对表达蛋白进行纯化，得到蛋白质索烃。