[发明专利]一种重组结核分枝杆菌的鉴定方法

摘要

一种重组结核分枝杆菌的鉴定方法，从H37Rv基因组中扩增Mr38 000 蛋白基因并高效表达和纯化。用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr 38 000蛋白序列，将其与pGEM-T-Easy 载体连接转化E.coli DH5α，构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/ Mr 38 000， 经Western-blot 鉴定目的基因与(His)6融合表达，通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化。PCR得到结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白基因，测序结果与GeBank 中报道的完全一致。SDS-PAGE显示，成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38 000 蛋白序列，并在E.coli DH5α高效表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白。

主权项

一种重组结核分枝杆菌的鉴定方法，从H37Rv基因组中扩增Mr38 000 蛋白基因并高效表达和纯化,用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr 38 000蛋白序列，将其与pGEM‑T‑Easy 载体连接转化E.coli DH5α，构建重组克隆载体pGEM‑T‑Easy/ Mr 38 000，测序正确后将目的基因片断克隆入pQE‑80L原核表达载体并转化E.coli DH5α，IPTG诱导目的蛋白表达,经Western‑blot 鉴定目的基因与(His)6融合表达，将已表达的蛋白质通过Ni‑NTA亲和色谱柱进行纯化,PCR得到结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白基因，测序结果与GeBank 中报道的完全一致,SDS‑PAGE显示， 在Mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带，Wesern blot鉴定为(His)6融合表达蛋白;经Ni‑NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白,成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38 000 蛋白序列，并在E.coli DH5α高效表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白。