[发明专利]利用双油体蛋白融合技术表达胶原蛋白

摘要

本发明公开了含双油体蛋白与胶原短肽融合蛋白的油体，利用重组DNA技术将拟南芥双油体蛋白与重组胶原短肽融合，构建了融合基因表达质粒表达载体pKO‑OL‑OL‑Col，转化至油料作物中，表达了融合蛋白，获得含双油体蛋白与胶原短肽融合蛋白的油体，操作简单、成本低廉、表达量高，含有双油体蛋白与重组胶原短肽融合蛋白的油体，具有较高的胶原蛋白的活性，能直接应用于化妆品的生产，降低了生产成本，省略了胶原蛋白提纯及与乳化剂（或保护剂）混合过程，双油体和融合蛋白一体更好地保护重组胶原蛋白短肽。

主权项

1.一种表达载体pKO‑O‑O‑Col，它是由下述方法制备的：1）以p1390为基本骨架，将其T‑DNA区进行改造，获得p1390‑35S‑Bar‑NOS基本质粒，筒称：pO ；2）用pstI和EcoRI分别酶切并连接pO质粒和SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，得中间载体pO1；3）将p O1用EcoRI和NcoI消化，与克隆的大豆油体蛋白基因连接，得到中间载体pOB；将pUC57‑终止子的克隆载体用HindIII和kpnI消化，回收目的片段nos终止子，同时用这两个酶消化pOB中间载体，将终止子与酶切后的pOB载体连接，产生了植物特异表达载体pKO‑O；所述的终止子，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；所述的大豆油体蛋白基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；4）用NcoI与HindⅢ分别酶切并连接植物表达载体pKO‑O和序列表SEQ ID NO.5所示基因，得表达载体pKO‑O‑O‑Col。