[发明专利]一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺

摘要

本发明公开了一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，包括以下具体工艺步骤：决明子粗蛋白的提取；决明子粗蛋白的提纯；决明子蛋白质peak2的分离纯化，包括：用离子交换柱纯化peak2，离子交换柱按照A液与B液依次交替的程序平衡；将peak2浓缩、脱盐，上样量为30mg-40mg/ml；离子交换柱用0-1.0mol的NaCl梯度、18mmol-22mmol pH为7.2-7.8的Tris-HCl的缓冲液进行洗脱，流速为0.8-1.5ml/min；peak2经离子交换柱层析被分成peakI、peakII和peakIII，收集peakII；从决明子中进行分化提纯出决明子蛋白质，以备进行药物制备及研究。

主权项

一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：包括以下具体工艺步骤：1）决明子粗蛋白的提取，包括：1‑1）在常温条件下，将决明子碾碎为20—80目粉末后过筛，后在4‑8℃环境下用石油醚或环己烷浸泡脱脂24‑48小时，分2‑4次进行；1‑2）回收溶剂，残渣按1g∶10‑50ml的体积浸泡于50mmol pH为7.8的KH₂PO₄‑NaOH中8‑12小时，重复3‑5次，合并提取液；1‑3）提取液离心24‑28min，取上清液；上清液边搅拌边加入硫酸铵至48％‑52％的饱和度，离心分离，保留沉淀；沉淀物在分子量3500‑7800的透析袋中进行脱盐；1‑4）冷冻干燥仪中‑30℃至‑60℃温度下进行冷冻干燥，得到粉末状决明子粗蛋白，‑25℃冷藏备用；2）决明子粗蛋白的提纯，包括：2‑1）将上述方法得到的粉末状决明子粗蛋白充分溶解于18mmol‑22mmol pH为7.2‑7.8的Tris‑HCl的缓冲液中；2‑2）用分子筛层析柱进行初步纯化，分子筛层析柱上样前先用含有0.2mol NaCl的步骤2‑1）所得缓冲液平衡2‑5倍柱体积；每次上样量为200μl‑220μl，监测波长为280nm，流速为0.4‑0.6ml/min；决明子粗蛋白经分子筛层析被分成5个峰：分别为peak1、peak2、peak3、peak4和peak5；3）决明子蛋白质peak2的分离纯化，包括：用离子交换柱纯化peak2，离子交换柱按照A液与B液依次交替的程序平衡，A液为18mmol‑22mmol pH为7.2‑7.8的Tris‑HCl，B液为0.8mol NaCl的A液；将peak2浓缩、脱盐，上样量为30mg‑40mg/ml；离子交换柱用0‑1.0mol的NaCl梯度、18mmol‑22mmol pH为7.2‑7.8的Tris‑HCl的缓冲液进行洗脱，流速为0.8‑1.5ml/min；peak2经离子交换柱层析被分成3个峰，分别为：peakI、peakII和peakIII，收集peakII。