[发明专利]一种鱼皮源基质金属蛋白酶拮抗肽

摘要

本发明提供了一种抑制光老化皮肤中基质金属蛋白酶活性多肽的制备方法，以鱼皮为原料，利用碱性蛋白酶和胰酶组合酶建立酶传感器-人工神经网络在线监控模型控制水解的进程使水解度在18％-19％，酶解液经0.22μm的微孔滤膜过滤后采用卷式超滤膜进行超滤截留分子量在300-1000Da的活性肽，最后采用SP-Sephadex C25阳离子交换柱和Sephadex G25凝胶柱进行逐级分离纯化，冷冻干燥得到主要特征片段为Gly-Pro基质金属蛋白酶(MMPs)拮抗目标肽。本发明制备的鱼皮明胶来源的生物活性肽能够显著的抑制由紫外线导致的皮肤中MMPs含量的升高，并且呈现较好的抗氧化活性，为以鱼皮明胶为原料制备具有抗皮肤光老化活性的生物活性肽的开发利用提供了更广阔的前景。

主权项

一种抑制基质金属蛋白酶活性的多肽，其特征在于，所述的多肽的制备方法如下：1)鱼皮明胶的制备将鱼皮在碱液中进行浸泡，浸泡结束后，水洗鱼皮至中性，然后再用酸溶液在室温浸泡，浸泡结束后水洗鱼皮至pH为5.0‑6.0，再将处理的鱼皮放入蒸馏水中，在40℃‑80℃水浴振荡提取；离心取上清液，得到鱼皮明胶；2)基质金属蛋白酶拮抗肽的靶向酶解将步骤1)制备的鱼皮明胶调节初始pH至7.2‑7.5，采用胰酶和碱性蛋白酶组合进行水解，酶解至产物的水解度为18％‑19％，终止酶解反应，离心分离，上清液即为基质金属蛋白酶拮抗肽的粗组分；3)基质金属蛋白酶拮抗肽的精制纯化步骤2)制备的粗组分经0.22μm的微孔滤膜过滤后，超滤得到分子量300‑1000Da的活性肽；然后采用SP‑Sephadex C25阳离子交换柱进行分离纯化：首先以0.02mol/L pH4.2的醋酸缓冲液平衡100‑150min，上样后再用0‑1.0mol/L的NaCl的醋酸缓冲液线性梯度洗脱，收集活性最高的第二个主峰；然后利用Sephadex G25凝胶柱进一步分离纯化，洗脱液为超纯水，流速0.4‑0.6mL/min，收集第二个主峰，脱盐后冷冻干燥，即为MMPs拮抗肽。