[发明专利]人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用

摘要

本发明涉及一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用。该试剂盒包括A液、B液、C液和质控标准品，所述A液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～10，优选pH6.5的缓冲体系；所述B液为0.1～10mM含有人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；所述C液为荧光素检测试剂；所述质控标准品为5mg/ml的hCE1的pH6.5的磷酸盐溶液。所述人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物为4，5‑二氢‑2(6‑羟基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯或4，5‑二氢‑2(6‑氨基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯,该试剂盒可用于检测不同生物样本中hCE1的存在与否及其酶活的定量测定，还用于快速筛选hCE1的抑制剂/诱导剂。本发明的优点为操作简单、单位检测成本低、灵敏、快速、可高通量检测。

主权项

1.一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如下四种试剂：A液、B液、C液和质控标准品；其中所述A液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～10；所述B液为0.1～10mM含有人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；所述C液为荧光素检测试剂，含0.5mM的ATP，10mM的Mg²⁺及50g/ml的荧光素酶；所述质控标准品为5mg/ml的hCE1的pH 6.5的磷酸盐溶液；所述人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物为4，5‑二氢‑2(6‑羟基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯或4，5‑二氢‑2(6‑氨基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯，其结构通式如式为：其中R为‑OH或‑NH₂；在缓冲体系中，上述化合物的甲酯键可被hCE1特异性水解为相应水解产物4，5‑二氢‑2(6‑羟基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酸或4，5‑二氢‑2(6‑氨基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酸。