[发明专利]一种兽用疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种兽用疫苗及其制备方法，所述疫苗由质量比为4‑11:89‑96的免疫佐剂和抗原水溶液组成。本发明的有益效果是：本发明兽用疫苗制备工艺简单、成本低、成分简单、剂型稳定，易储存，易于注射，使用方便，作用效果好，无毒副反应，在畜牧业中的开发利用潜力巨大，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种兽用疫苗，所述疫苗由质量比为4‑11:89‑96的免疫佐剂和抗原水溶液组成；所述抗原水溶液由血凝效价≥10log2的兔出血症病毒病料与生理盐水按质量比1:10的比例混合，充分匀浆后得到抗原水溶液；所述免疫佐剂由下列原料以质量份组成：泰山松花粉多糖5‑30份、蜂胶5‑10份、芦荟多糖5‑10份、覆盆子多糖8‑14份、老君须多糖3‑6份、打碗花多糖4‑9份、亲水性表面活性剂0.1‑10份、高分子胶束物质0.1‑10份和水40‑90份；所述亲水性表面活性剂为司班80和普鲁尼克121的混合物；所述司班80和普鲁尼克121的质量份数比为：司班80为1‑2.5份、普鲁尼克121为1‑3份；所述高分子胶束物质为壳聚糖和卡波姆971P的混合物；所述壳聚糖和卡波姆971P的质量份数比为：壳聚糖为1‑3份、卡波姆971P为2‑3份；所述泰山松花粉多糖的提取方法为：将破壁后的泰山松花粉用索氏提取器在48℃‑50℃抽提脂肪2h后得产物1，产物1加入占产物1质量0.3%的胃蛋白酶在50℃反应2h除蛋白后，用80‑100℃热水浸提7‑10h，随后降温至4℃沉淀8‑12h，然后取上清液一以10000 r/min过滤离心10 min，在200 r/min和 60℃条件下减压浓缩，得浓缩液；取Sevage试剂和浓缩液按质量比为1：3混合均匀后放置3h后，取上清液二；再将上清液二与Sevage试剂按质量比3:1混合均匀，静置2h后, 取上清液三，然后将上清液三用无水乙醇沉淀7‑10h，将沉淀物在‑15℃～‑20℃冷冻干燥得到松花粉多糖；所述覆盆子多糖的制备方法包括以下步骤：取覆盆子洗净干燥后将果肉粉碎制得覆盆子干粉，加入质量为覆盆子干粉质量7～9倍的石油醚和醇浓度为95％的乙醇混合物浸泡并超声处理30～40 min，过滤后，得残渣一；用相对于残渣一质量10～15倍的醇浓度90%～95%的乙醇浸泡，加热回流1～2h后提取，过滤，得第一过滤液和残渣二；残渣二中加入相对于残渣二质量10～15倍的去离子水后，加入复合酶A于30‑39℃、pH5‑6.5下酶解5h‑6h，酶解结束后灭酶得到提取液；将第一过滤液和提取液混合后在真空度0.06～0.09MP a下减压浓缩至50～60℃时相对密度为1.04～1.10的膏体，向膏体中加入相对于膏体质量6‑8倍的醇浓度为95%的无水乙醇，沉淀8h，高速离心后真空干燥得覆盆子多糖；所述复合酶A为酸性木聚糖酶和β‑葡聚糖酶组成的复合酶，酸性木聚糖酶质量用量为覆盆子干粉质量的2.0％、β‑葡聚糖酶质量用量为覆盆子干粉质量的4.5％；所述石油醚和醇浓度95％的乙醇体积比为1:5；和/或所述芦荟多糖的制备方法包括以下步骤：取2‑3年芦荟鲜叶洗净，在去离子水中浸泡20‑40min，以除去表皮渗出的黄色液汁,然后切去表皮，将内层凝胶剪碎，用匀浆机匀浆后取上清液在 4℃冷藏8‑10h得到芦荟汁;将芦荟汁与去离子水按质量比1:12‑15比例混合，加入复合酶B在32‑36℃、pH5.2‑6.5下酶解5‑8h, 酶解结束后灭酶得提取液，将提取液在真空度0.06～0.09MP a下减压浓缩至50～60℃时相对密度为1.04～1.10的膏体，向膏体中加入相对于膏体质量5‑7倍的醇浓度为95%的无水乙醇，沉淀8h，高速离心得芦荟多糖沉淀；再用Sevage试剂和芦荟多糖沉淀质量比为1:3混合均匀静置1‑2h，然后取上清液真空干燥得芦荟多糖；所述复合酶B为酸性木聚糖酶和β‑葡聚糖酶组成的复合酶，酸性木聚糖酶质量用量为芦荟汁质量的3.0％、β‑葡聚糖酶质量用量为芦荟汁质量的2.5％；所述老君须多糖的制备方法包括以下步骤：取老君须洗净干燥后，粉碎制得老君须干粉，老君须干粉与去离子水按1:15‑20混合，80‑90℃浸提8h，减压浓缩后离心3次，每次离心的转速为12000r/min ，每次离心的时间为12min，每次离心的温度为15℃，以除尽杂质；随后在真空度0.06～0.09MP a下减压浓缩至50～60℃时相对密度为1.04～1.10的膏体，向膏体中加入相对于膏体质量5‑7倍的醇浓度为95%的乙醇，沉淀8 h，高速离心得老君须多糖沉淀；再用Sevage试剂和老君须多糖沉淀质量比为1:3混合均匀，静置1‑2h后取上清液真空干燥得老君须多糖；所述打碗花多糖的制备方法包括以下步骤：取打碗花洗净干燥后，粉碎制得打碗花干粉，打碗花干粉与去离子水按1:18‑22混合，85‑95℃浸提8h，减压浓缩后离心3次，离心工艺参数为11000 r/min、15 min和20℃，以除尽杂质；随后在真空度0.05～0.07MP a下减压浓缩至60～70℃时相对密度为1.1～1.15的膏体，向膏体中加入相对于膏体质量8‑9倍的醇浓度为95%的无水乙醇，沉淀8h，高速离心得打碗花多糖沉淀；再用Sevage试剂和打碗花多糖沉淀质量比为1:3混合均匀，静置1‑2h后取上清液真空干燥得打碗花多糖。