[发明专利]一种副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明提供一种副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗的制备方法，取菌株LYD1、菌株LYH5、菌株LY02、菌株LYW1和菌株LYC2并分别进行繁殖培养，得到菌株LYD1菌液、菌株LYH5菌液、菌株LY02菌液、菌株LYW1菌液及菌株LYC2菌液；将各菌液分别进行浓缩与灭活，之后按对应配比配制成总混合菌液；接着依次进行水相配制、油相配制及乳化操作。本发明所制得的副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗不仅安全性良好，而且能够同时针对多种血清型的副猪嗜血杆菌引起的疾病进行防治。

主权项

1.一种副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗的制备方法，其特征在于：包括如下具体操作步骤为：(1)繁殖培养：取菌株LYD1、菌株LYH5、菌株LY02、菌株LYW1和菌株LYC2并分别进行繁殖培养，得到菌株LYD1菌液、菌株LYH5菌液、菌株LY02菌液、菌株LYW1菌液及菌株LYC2菌液；其中，所述菌株LYD1为副猪嗜血杆菌菌株LYD1(Haemophilus parasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11143；所述菌株LYH5为副猪嗜血杆菌菌株LYH5(Haemophilusparasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11144；所述菌株LY02为副猪嗜血杆菌菌株LY02((Haemophilusparasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11145；所述菌株LYW1为副猪嗜血杆菌菌株LYW1(Haemophilusparasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11146；所述菌株LYC2为副猪嗜血杆菌菌株LYC2(Haemophilusparasuis)，于2015年07月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11147；(2)浓缩与灭活：将步骤(1)所得各菌液分别进行浓缩，且菌株LYD1菌液、菌株LYW1菌液、菌株LYC2菌液均浓缩至菌液中的抗原含量为2.5×10 9CFU/mL，菌株LYH5菌液、菌株LY02菌液则均浓缩至菌液中的抗原含量为2.0×109CFU/mL；接着将浓缩后的各菌液分别进行灭活；(3)总混合菌液的制备：取已浓缩、灭活后的菌株LYD1菌液、菌株LYW1菌液及菌株LYC2菌液并按1:1:1的体积比混合，获得第一混合菌液；取已浓缩、灭活后的菌株LYH5菌液、菌株LY02菌液并按1:1的体积比混合，获得第二混合菌液；之后将所得第一混合菌液与第二混合菌液按1:1.5的体积比混合则得总混合菌液；(4)水相配制：按体积份取已灭菌的吐温‑80 4份、无菌检验合格的总混合菌液96份，并导入配液罐中，开启搅拌电机，匀速搅拌至吐温‑80完全溶解，获得水相；(5)油相配制：按体积份取注射用白油94份、司本‑80 6份并加至油相制备罐中，开启搅拌电机，匀速搅拌，同时开启导热油开关，125℃加热30min，冷却后即得油相；(6)乳化：取油相1.5体积份置于乳化罐内，开动电机1500‑2000r/min搅拌，同时缓缓加入水相1体积份，再以4000r/min乳化30min；乳化后，取样10mL并以3000r/min离心15min，若不分层则乳化所得乳化液即为所述副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗；若有分层现象则将所得乳化液重复乳化直至不分层，最终即得所述副猪嗜血杆菌五价灭活疫苗。