[发明专利]一种杧果组织RNA的提取方法

摘要

本发明属于生物化学技术领域，具体的说是涉及一种杧果组织RNA的提取方法。本发明的提取方法用LiCL溶液替代现有技术中的醋酸钾溶液，结合乙醇进行第二次分离沉淀RNA，结果对RNA选择性沉淀效果好，大大减少了无效沉淀对RNA产物的干扰，纯度和得率都大大提高，提高了杧果叶片RNA的提取质量和成功率。

主权项

1.一种杧果组织RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取0.5g杧果叶片放入研钵内，加入0.05g聚乙烯吡咯烷酮，用液氮将杧果叶片研磨成粉末，将其转移至2mL离心管中，用丙酮溶液洗涤2‑3次，每次洗涤后12000r/min4℃离心5min，弃去丙酮，将收集有沉淀的离心管置于冰上开口干燥5‑10min，得到干燥后的沉淀；（2）在步骤(1)所得沉淀中加入600μL提取缓冲液，室温下振荡充分混匀；加入150μL无水乙醇，66μL5mol/L的乙酸钾，振荡充分混匀；加入800μL苯酚:氯仿:异戊醇25:24:1，12000r/min4℃离心抽提2次，弃去沉淀，获得上清液即为RNA粗提取液；（3）在RNA粗提取液中加入LiCL溶液至终浓度，‑20℃过夜沉淀RNA，12000r/min4℃离心10min收集沉淀，再用3mol/LLiCL洗涤沉淀2次，每次洗涤后均用12000r/min4℃离心10min收集沉淀；（4）用DEPC处理水溶解沉淀，加入LiCL溶液至终浓度，再加入2倍体积的无水乙醇，于‑20℃过夜沉淀RNA；用75％乙醇和无水乙醇各洗涤1次，每次洗涤后用12000r/min4℃离心10min收集RNA沉淀；将收集有RNA沉淀的离心管开口倒置干燥2‑4min除去乙醇，用30μLDEPC处理水溶解RNA沉淀并保存于‑80℃冰箱，备用；步骤（1）中所述的杧果叶片为新鲜的杧果叶片；步骤（1）中所述的丙酮溶液中β‑巯基乙醇质量百分含量为1％；步骤（2）中所述的提取缓冲液成分为：2％SDS、1％β‑巯基乙醇、50mMEDTA 和150mMTris，加入弱酸调提取缓冲液pH为7.5；所述的弱酸为硼酸；步骤（3）中所述的LiCl溶液的终浓度为3mol/L；步骤（4）中所述的LiCl溶液的终浓度为0.3mol/L。