[发明专利]用于土壤次生盐渍化监测的绿色荧光蛋白的表达及应用方法在审
| 申请号： | 201510629664.9 | 申请日： | 2015-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN105238808A | 公开（公告）日： | 2016-01-13 |
| 发明（设计）人： | 周培;初少华;张丹;支月娥;詹学佳;毛亮;王大欣 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12Q1/06;C12R1/11 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人： | 王毓理;王锡麟 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种用于土壤次生盐渍化监测的绿色荧光蛋白的表达及应用方法，根据设计出的PCR引物扩增出含有酶切位点的绿色荧光蛋白gfp基因序列，将其与pMD18‐T质粒连接，重组质粒与穿梭质粒pHIS1525分别酶切后连接，连接产物转入大肠杆菌DH5α中，通过菌落PCR技术挑选含有目的基因片段的阳性克隆。提取重组质粒pHIS1525‐GFP，将其转入已制备好的巨大芽孢杆菌NCT‐2原生质体中，转化子能够表达绿色荧光蛋白。将转化菌株接种到次生盐渍化土壤中，通过监测荧光菌株来分析巨大芽孢杆菌NCT‐2在次生盐渍化土壤中的存活情况。本发明具有快速简便且可实时监测的特点，有利于科学有效地指导该菌株菌肥的施用。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 土壤 次生 盐渍化 监测 绿色 荧光 蛋白 表达 应用 方法 | ||
【主权项】：
一种用于土壤次生盐渍化监测的绿色荧光蛋白的表达方法，其特征在于，将gfp基因连接到大肠杆菌‐巨大芽孢杆菌的穿梭质粒pHIS1525上，构建成pHIS1525‐GFP质粒，转化大肠杆菌，然后提取该质粒，通过原生质体转化方法将重组质粒转入巨大芽孢杆菌NCT‐2中，获得了表达绿色荧光蛋白的巨大芽孢杆菌菌株NCT‐2‐GFP；所述的巨大芽孢杆菌NCT‐2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.4698。
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