[发明专利]一种放线菌纤溶酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种放线菌纤溶酶的制备方法，所述方法的具体步骤如下：（1）向含有放线菌纤溶酶的发酵上清液中加入硫酸铵粉末，使其饱和度为25％-35%W/V，4℃放置过夜后，进行离心得到上清液，再向该上清液中加入硫酸铵粉末，使其饱和度为55-65%W/V，4℃放置过夜后，进行离心得到沉淀，用PB缓冲液将沉淀溶解，得到粗酶液；（2）将步骤（1）得到的粗酶液进行低温离心除杂质，得到的上清液依次通过Octyl-Sepharose FF疏水相互作用层析和Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用层析纯化，得到色谱纯的酶，经透析除盐后冷冻干燥制得纤溶酶冻干粉，放入-20℃条件下可长期保存。本发明的放线菌纤溶酶的分离纯化方法具有操作步骤简单、回收率高的优点。

主权项

一种放线菌纤溶酶的制备方法，该放线菌保藏号为CGMCC No.5816，分类学命名为放线菌Actinomycetesp.，经液体发酵得到含纤溶酶的发酵液，经离心收集富含纤溶酶的上清液，依次采用硫酸铵分级盐析、Octyl‑Sepharose FF疏水相互作用层析、Phenyl‑Sepharose HP疏水相互作用层析、透析除盐、冷冻干燥制备得到纤溶酶冻干粉，经过Q‑TOF2串联质谱测得纤溶酶五个肽段的氨基酸序列分别为：A‑Q‑S‑V‑P‑Y‑G‑L‑S‑Q‑L‑K，其分子量为1289.6644；V‑A‑V‑L‑D‑S‑G‑L‑D‑S‑S‑H‑P‑D‑L‑K，其分子量为1651.8243；N‑S‑L‑E‑S‑T‑A‑T‑N‑L‑G‑N‑P‑A‑G‑A‑T‑Y‑G‑K，其分子量为1964.8844；h‑p‑n‑w‑T‑n‑t‑n‑v‑r，其分子量为1237.5844；Y‑P‑S‑V‑L‑A‑V‑G‑A‑V‑D‑N‑G‑V‑S‑N‑K，其分子量为1688.8043。