[发明专利]一种硬叶兰组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种硬叶兰组培快繁方法，属于植物组织培养研究领域。硬叶兰为兰属附生植物，生于林中或灌丛中的树木上，具有极高的观赏和药用价值。本方法包括如下步骤：蒴果灭菌、种子萌发培养、增殖培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽。通过以上步骤实现了硬叶兰的组织培养和快速稳定繁殖，本方法重复性好，繁殖系数高，获得的再生幼苗健壮、整齐，植物学性状稳定，可短时间内大量繁殖，对硬叶兰种质资源保护和优质种苗产业化生产具有重要意义。

主权项

一种硬叶兰组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）蒴果灭菌：采集八成熟的硬叶兰蒴果，用75%酒精灭菌20s，0.1%升汞灭菌10min，无菌水冲洗4～5次，再用0.1%升汞灭菌3min，无菌水冲洗4～5次，吸干表面水分；（2）种子萌发培养：将消毒后的蒴果在无菌条件下切开，将种子均匀撒播在种子萌发培养基上，种子萌发培养基组成为VW+6‑BA0.2～0.5mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+AC1.0～1.5g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，PH为5.6～6.5，光照培养45～50d后种子发育成原球茎；（3）增殖培养：将原球茎切成小块接种于增殖培养基，增殖培养基成分为：1/2VW+6‑BA4～7mg/L+NAA0.6～1.0mg/L+AC1.0～1.5g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，PH为5.6～6.5，光照培养30～35d后得到大量的原球茎团；（4）分化培养：将增殖培养得到的原球茎团接种于分化培养基，分化培养基成分为：1/2VW+6‑BA0.1～0.3mg/L+NAA0.3～0.6mg/L+KT0.5～0.8mg/L+AC1.0～1.5g/L+土豆泥80g/L+蔗糖30g/L，PH为5.6～6.5，光照培养30～35d后，每个原球茎团分化成8～10个丛生芽，将丛生芽切割分成单芽，备用；（5）生根培养：将单芽转入生根培养基，生根培养基成分为：1/2VW+IBA0.2～0.5mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+AC1.0～1.5g/L+土豆泥80g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，PH为5.6～6.5，光照培养30～35d可得到试管苗；（6）炼苗移栽：挑选生长健壮、根系长至2～3cm的试管苗带瓶置于常温、自然光条件下炼苗7～15d，取出试管苗，用清水洗去培养基，用多菌灵50%可湿性粉剂800～1000倍液浸苗12min，移栽至苗床，苗床基质由碎树皮、泥炭和珍珠岩按体积比3:2:1混合而成，环境要求通风良好，遮光70%，空气相对湿度75%～80%，15～20d即可成活。