[发明专利]草莓脱毒原原种苗的获取方法及保存方法

摘要

本发明公开了草莓脱毒原原种苗的获取方法，包括以下步骤：1）取材与清洗，2）灭菌消毒，3）再生幼苗，4）茎尖脱毒及诱导，5）幼苗增殖；并提供了以此方法获取的草莓脱毒原原种苗的保存方法。本发明的有益效果为：采用了匍匐茎前端组培成试管的短缩茎尖剥离脱毒，大大降低了褐化率和污染率、尤其是内生菌的后期污染，大幅提高了茎尖分生组织的脱毒率和成活率；获取的原原种苗（无毒试管苗）或茎尖分生组织在适宜的温度、湿度、光照条件下保存，能保持品种的优良性状、遗传稳定性，大大减少人力和物力的消耗，给工厂化生产提供快速便捷的原原种苗，有效缩短从脱毒到规模生产的周期，同时有效降低了生产成本与劳动成本。

主权项

草莓脱毒原原种苗的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取材与清洗：在8～10月份，选取田间长势健壮、结果多、果形正、具有品种典型性状的草莓匍匐茎掐取前端3～4cm，放入容量为1升的灭菌过的烧杯中，用纱布罩在杯口，常温下以自来水冲洗1.5～2小时；2）灭菌消毒：在超净工作台上，将步骤1）得到的冲洗过的草莓匍匐茎放入无菌烧杯中，先用75%酒精消毒30～40s，无菌水冲洗2～3遍，再用0.1%的升汞溶液消毒4～5 min，采用灭菌过的玻璃棒顺一个方向搅拌，最后以无菌水冲洗4～5遍，每次1分钟，迅速用滤纸吸干，得到无菌匍匐茎；3）再生幼苗：在超净工作台上用手术刀切取步骤2）得到的无菌匍匐茎的前端0.8～1cm，放入MS培养基中，培养长成幼苗；4）茎尖脱毒及诱导：在变倍体显微镜下，用接种针剥取幼苗上带有一个叶原基的短缩茎尖，大小为0.2mm～0.3 mm,放入诱导培养基中诱导50～60天，长成0.5～0.8cm高的带根系的脱毒幼苗；诱导培养基为加入6‑苄氨基腺嘌呤0.08～0.13mg/L 和吲哚丁酸0.91～1.07mg/L 的MS培养基；5）幼苗增殖：将步骤4）得到的脱毒幼苗放入增殖培养基中25～35天长成丛生试管苗；增殖培养基为加入6‑苄氨基腺嘌呤0.19～0.21mg/L的MS培养基。