[发明专利]一种大肠杆菌发酵生产重组芳香基硫酸酯酶的发酵方法

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌发酵生产重组芳香基硫酸酯酶的发酵方法，首先利用pET-28a(+)和芳香基硫酸酯酶基因atsA基因构建得到的重组大肠杆菌菌种，包括：种子的活化与制备，摇瓶发酵，罐上发酵及中试放大发酵；本发明在摇瓶发酵的基础上，对所筛选的重组大肠杆菌进行了发酵罐的发酵培养，研究其在发酵罐中的产酶规律，有效的提高了重组芳香基硫酸酯酶的产量。最后对重组大肠杆菌发酵产芳香基硫酸酯酶进行了中试放大发酵，为今后的大规模生产提供了重要的技术参数指导。

主权项

一种大肠杆菌发酵生产重组芳香基硫酸酯酶的发酵方法，首先利用pET‑28a(+)和芳香基硫酸酯酶基因atsA基因构建得到的重组大肠杆菌菌种，并采用LB培养基对宿主菌进行培养；其特征在于：还包括如下步骤：步骤一、种子的活化与制备：将上述重组大肠杆菌菌种接至所述LB培养基中，37℃培养12h，获得摇瓶种子液；步骤二、摇瓶发酵：摇瓶种子液接种至装有LB培养基的摇瓶之中，37℃培养至OD₆₀₀长到0.6，加入诱导剂乳糖，使乳糖浓度达到4mg/ml，然后在21℃诱导培养24‑36h，获得含有重组芳香基硫酸酯酶的发酵液；步骤三、罐上发酵：摇瓶种子液接种至装有LB培养基的5L发酵罐中，37℃培养至OD₆₀₀长到0.6，加入诱导剂乳糖，使乳糖浓度达到4mg/ml，然后在21℃诱导培养24‑36h，获得含有重组芳香基硫酸酯酶的发酵液；步骤四、中试放大发酵：摇瓶种子液接种至装有LB培养基的20L和200L发酵罐中，37℃培养至OD₆₀₀长到0.6，加入诱导剂乳糖，使乳糖浓度达到4mg/ml，然后在21℃诱导培养12‑36h，获得含有重组芳香基硫酸酯酶的发酵液。