[发明专利]酰化胰岛素的色谱纯化方法

摘要

本发明公开了一种酰化胰岛素的色谱纯化方法，属于重组胰岛素或胰岛素类似物的制备领域。本发明酰化胰岛素的色谱纯化方法以高级硅胶载体(如C4、C8和C18等烷烃为配基的反相填料)作为层析填料，利用高压色谱系统对酰化胰岛素进行精细分离纯化，在pH为6.5‑8.0的碱性洗脱液环境下，可一步将粗样品纯度由50‑60％提高至99.0％以上，纯化后样品收率稳定在90％以上。另外，本发明方法粗样样品上样量大，极大的节省了纯化成本；色谱纯化过程中线性流速高，可做到对胰岛素类似物的快速纯化。本发明方法操作简单、稳定可靠，具有较强的可放大性，适合作为工业化制备胰岛素类似物的色谱纯化方法。

主权项

1.一种酰化胰岛素的色谱纯化方法，包括以下步骤：（1）以硅胶载体作为层析填料，将色谱柱用平衡液进行平衡，将待纯化的酰化胰岛素粗品上样，用平衡液平衡色谱柱；（2）用洗脱用流动相进行洗脱，收集主峰，得到目的产物酰化胰岛素；其中，洗脱用流动相由A相和B相组成；其特征在于：所述A相的pH值为7.0‑8.0；按照体积比计，步骤（1）所述平衡液由75%‑90%的A相和10%‑25%的B相组成；所述层析填料选自C4‑5µm‑100Å，C8‑5µm‑100Å或C18‑5µm‑100Å中的任意一种；所述A相为磷酸盐缓冲液、磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或硼酸‑硼砂缓冲液中的任意一种；所述B相由乙腈或乙醇与水组成；所述待纯化的酰化胰岛素粗品是由去B30的人胰岛素和选自以下任意一种的脂肪酸酯反应制得的酰化胰岛素溶液：棕榈酸N‑琥珀酰亚胺基酯、辛酸N‑琥珀酰亚胺基酯或肉豆蔻酸N‑琥珀酰亚胺基酯。