[发明专利]一种人类粪便甲基化DNA的PCR检测引物体系

摘要

一种人类粪便甲基化DNA的PCR检测引物体系，筛选出一组12个基因，根据目标检测区域甲基化DNA经重亚硫酸盐处理转化后是的序列，设计PCR引物。使每条引物序列中包含2-3个CpG位点，以提高引物对甲基化DNA的偏向性扩增；使这一组基因的每个PCR扩增产物的长度，呈梯度分布；使每个PCR扩增产物的变性温度在82-84度。本发明的有益效果在于：本发明设计独特的甲基化基因PCR扩增引物，克服目前的甲基化基因检测技术灵敏度不够高、检测稳定性差缺点，提供一种人类粪便甲基化DNA的PCR检测引物体系，该引物体系及用该引物体系进行的鉴定方法可快速准确的检测人类粪便的DNA是否发生变化。

主权项

一种人类粪便甲基化DNA的PCR检测引物体系，其特征在于：所述的引物体系由以下12个甲基化DNA的PCR扩增引物对组成：（1）SNCA基因引物对Ⅰ:正向引物：5’‑TGCGGGTTGTAGCGTAGATTTCG‑3’反向引物：5’‑CCGCTATAAACCGACGACGC‑3’；（2）SPG20基因引物对Ⅱ:正向引物：5’‑TGACGCGAAGCGTTCGAGAG‑3’反向引物：5’‑ACGCTCGCCGAAAACCGATC‑3’；（3）ADAMTS1基因引物对Ⅲ:正向引物：5’‑AGGATCGTTCGGTTGTTCGGT‑3’反向引物：5’‑AAACGCTCTAAAACGCCTCCG‑3’；（4）SFRP5基因引物对Ⅳ:正向引物：5’‑GCGTACGGCGAGGTTCGGGT‑3’反向引物：5’‑CTCGATACCCGACGACCCAAAT‑3’；（5）SLC5A8基因引物对Ⅴ：正向引物：5’‑TAGCGGGTCGATTTTTCGAGG‑3’反向引物：5’‑CTAACGCGCAAACGTAACGTC‑3’；（6）IGFBP3基因引物对Ⅵ：正向引物：5’‑GTTTTCGTAGTCGTGTTTGCGT‑3’反向引物：5’‑ACTCGCATCTAAACGACCCGA‑3’；（7）GALR2基因引物对Ⅶ：正向引物：5’‑GATTTCGGATTTTGCGTGTGCG‑3’反向引物：5’‑CTCGACGATCCCGAAATATCC‑3’； （8）SLC16A12基因引物对Ⅷ：正向引物：5’‑AGTTTTCGGCGGAGTTGGCG‑3’反向引物：5’‑CGAACTAAACGAAAACGCCGAC‑3’； （9）SPOCK2基因引物对Ⅸ：正向引物：5’‑TGCGGATTTACGTTTCGGAAGCG‑3’反向引物：5’‑TAACCGCGACAACCCTAACCGA‑3’； （10）TLX2基因引物对X：正向引物：5’‑TGTATTCGGAGTAGTCGCGTTCG‑3’反向引物：5’‑ACCCGAACCGATCCGTCAATCA‑3’； （11）HLTF基因引物对XI：正向引物：5’‑GTTTTTGATTCGGCGTTCGGAA‑3’反向引物：5’‑TCCAAACCGTTAAACCGAACGC‑3’； （12）HPP1基因引物对XII：正向引物：5’‑GTTTTTCGCGTTTTCGGCGTAG‑3’反向引物：5’‑AACATCCCGCGAACGACGAC‑3’。