[发明专利]一种体外培养碘泡虫的方法

摘要

一种体外培养碘泡虫的方法，属于寄生虫体外培养技术领域，分别采用鲫鱼肌肉匀浆和鲫鱼鳃匀浆作为培养载体进行碘泡虫体外培养，包括以下步骤，步骤一、抗生素的配置，步骤二、鲫鱼鳃组织匀浆上清培养液的配置，步骤三、碘泡虫的体外培养，步骤四、计数及绘制生长曲线。本发明对碘泡虫的培养条件进行优化，使碘泡虫在寄主之外的一个适宜环境中得以繁殖，为之后的药效学或疫苗的研究提供大量的基础材料，并促进碘泡虫引发的疾病或粘孢子虫病的进一步研究。

主权项

一种体外培养碘泡虫的方法，其特征是：采用鲫鱼肌肉匀浆为培养载体进行碘泡虫体外培养的方法，包括以下步骤，步骤一、抗生素的配置在无菌操作台上，取青霉素钠0.96g和硫酸链霉素1g溶解于100mL的经过消毒处理的去离子水中混合，采用移液管移取上述溶液8mL置于经消毒处理的玻璃瓶内，且分装为12个玻璃瓶内，采用封口膜将12个玻璃瓶封口，置于‑20℃的冰箱内保存备用；步骤二、鲫鱼肌肉组织匀浆上清培养液的配置取鲫鱼肌肉组织5g，加入500mL过滤水，采用匀浆机将匀浆打碎后离心10min，取离心后上清液加入5mL抗生素保存备用；将1mL鲫鱼肌肉组织匀浆上清液加入到经0.22μm滤膜过滤的250mL水中，作为试验培养液母液；步骤三、碘泡虫的体外培养(1)从体内含有碘泡虫的鱼中取出孢囊，用1.5mL的离心管将孢囊收集，采用试验培养液母液进行冲洗离心至获得孢子；(2)将孢子置于50mL细胞培养瓶中，向细胞培养瓶中加入1mL试验培养液母液、4mLDMEM细胞培养液、50μL抗生素；(3)取六孔培养板，向六孔培养板的每个孔中加入100μL的上述培养瓶中取出的碘孢子虫，400μL肌肉组织匀浆上清培养液，1500μL DMEM细胞培养液，400μL的胎牛血清，在26℃的温度条件下连续培养；步骤四、计数及绘制生长曲线在所述步骤三的连续培养过程中，每间隔72小时，进行一次计数，计数时将六孔培养板中所培养的碘泡虫混匀，并从每一培养孔中分别吸取10μL的碘泡虫，并用细胞计数板进行计数，根据记录的数据绘制生长曲线。