[发明专利]一种花生高油酸回交育种后代基因型的快速精准鉴定方法

摘要

本发明属于花生遗传育种领域，具体涉及一种花生高油酸回交育种后代基因型的快速精准鉴定方法。本发明利用花生fad2A和fad2B基因序列的高度相似性，以及高油酸突变SNP位点分别位于Fad2B基因的ORF442和Fad2A基因的ORF448bp临近区段，设计特异性PCR引物，利用PCR反应同时扩增出Fad2A和Fad2B基因片段，并通过PCR产物直接测序的方法，区分花生高油酸回交后代中的4种基因型。本发明所述鉴定方法具有试验技术要求低、操作程序和所需设备简单、结果精准可靠等特点，采用本发明所述鉴定方法可以准确的判定回交育种后代的基因型，为正确选择基因型AaBb的种子作为下一代回交的花粉供体提供了技术支持。

主权项

一种花生高油酸回交育种后代基因型的快速精准鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）回交育种后代花生种子子叶薄片样品的获取：用刀片从远胚根端在子叶上切取薄片组织，加入钢珠、液氮冷冻后，立即研磨得到花生种子子叶薄片样品；花生种子子叶薄片样品的DNA提取；采用CTAB法提取花生种子子叶薄片样品的基因组DNA；（2）以提取的基因组DNA为模板，采用特异性引物进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；所述特异性引物的引物序列为：F0.7：5‑CACTAAGATTGAAGCTC‑3；R3：5‑CCCTGGTGGATTGTTCA‑3；以R3：5‑CCCTGGTGGATTGTTCA‑3为测序引物，对PCR扩增产物进行直接测序；（3）根据测序峰图判定回交育种后代花生种子的基因型。