[发明专利]一种环状芽孢杆菌的高通量筛选方法

摘要

本发明属于发酵工程和微生物育种的技术领域，公开了一种产β-半乳糖苷酶的环状芽孢杆菌的高通量筛选方法。主要步骤是：将初始菌株活化后，经过紫外线诱变和氯化理诱变，用96孔板进行高通量筛选，得到酶能力提高的环状芽孢杆菌突变株。本发明利用传统物理与化学相结合的诱变方式，提高菌株的突变机率，采用高通量筛选工具，减少筛选工作量，提高筛选效率，加快菌种选育的进程，筛选出最佳菌株。

主权项

一种环状芽孢杆菌的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)出发菌活化：将环状芽孢杆菌进行划线培养，挑取单菌落于新鲜的LB培养基中培养，然后离心收集菌体，重新悬浮于无菌水中；(2)紫外诱变：将步骤(1)细胞悬浮液用紫外灯照射；(3)氯化理诱变：照射处理后的菌液，立即放入新鲜的LB培养基中，避光培养，并稀释菌液浓度，红光下涂布于含LiCl的LB平板进行培养；(4)菌株的筛选：向步骤(3)中诱变获得的突变株中滴入X‑gal溶液，观察菌落的显色情况，筛选菌落变深蓝的突变株，接种于含有培养基的96孔板；(5)将上述96孔板置于摇床中培养，通过检测β‑半乳糖苷酶活力进行筛选，得到F1代；(6)将F1中β‑半乳糖苷酶活力最高的菌株重复步骤(2)～(5)，得到高产β‑半乳糖苷酶的环状芽孢杆菌菌株。