[发明专利]一种用于生产低乳糖饮用乳的固定化酶磁性微球的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于生产低乳糖饮用乳的固定化酶磁性微球的制备方法，属于乳糖酶领域。本发明以氯化亚铁、氯化铁、氨水为主要原料，采用化学共沉淀法合成了氧化铁微粒，再和壳聚糖一起制成磁性壳聚糖微球，向磁性壳聚糖微球中加入乳糖酶溶液进行交联反应，用磁性使壳聚糖微球将乳糖酶固定，生产出低乳糖饮用乳的固定化酶磁性微球，本发明用磁性壳聚糖微球作为载体固定化乳糖酶，使乳糖酶保持酶的天然活性，又便于与反应液分离，方便重复使用，而且其贮存稳定性好。

主权项

一种用于生产低乳糖饮用乳的固定化酶磁性微球的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按摩尔比为9:5称取质量分数15%氯化铁和质量分数25%硫酸亚铁混合溶液倒入带有搅拌器和温度计的三口烧瓶中，之后用注射器将质量浓度为30%的氨水逐滴滴入三口烧瓶中，调节pH至10～12，移入水浴锅升温至40～50℃，放置在磁力搅拌机上以600～700r/min的转速搅拌20～30min，继续升温至70～80℃，保温陈化1～2h；（2）将陈化后的混合物移入卧式离心机，以8000～9000r/min的转速高速离心处理10～15min，分离得到沉淀物，将沉淀物用去离子水冲洗多次直至pH为7～8，得氧化铁微粒；（3）称取5～10g壳聚糖溶于200～300mL质量浓度为10%的乙酸溶液中，用玻璃棒搅拌均匀使壳聚糖完全溶解，再加入10～20g上述制得的氧化铁微粒，放入超声振荡仪超声振荡混合10～20min；（4）在带有搅拌器和加热装置的三口烧瓶中加入上述超声混合后的溶液，再向其中加入80～90mL石蜡油、7～8mL聚山梨酯‑80和0.3～0.5g硬脂酸镁，升温至40～50℃，启动搅拌器以200～300r/min的转速搅拌，并在搅拌过程中滴加3～5mL聚乙二醇，保持转速搅拌反应1～2h，再用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节pH至10～12，升温至60～70℃，继续反应2～3h，过滤后得到沉淀物，用去离子水冲洗3～5次，得到磁性壳聚糖微球；（5）取500～600mg上述制得的磁性壳聚糖微球加入到250mL的三角瓶中，倒入50～100mL磷酸缓冲溶液充分溶胀12～18h，之后加入质量浓度为80%的乳糖酶溶液，放入冰水浴，在4～6℃下充分吸附1～2h，再加入质量浓度为40%的戊二醛溶液，升温至30～40℃，保温40～60min发生交联反应；（6）在上述发生交联反应的三角瓶底部均匀放置磁铁，将瓶中磁性微球沉淀下来，倾倒去除上清液，收集沉淀物并用磷酸缓冲液冲洗3～5次后移入烘箱，在50～60℃下干燥2～3h，即得一种用于生产低乳糖饮用乳的固定化酶磁性微球。