[发明专利]一种双微生物发酵制备γ-聚谷氨酸有机肥的方法

摘要

本发明涉及一种双微生物发酵制备γ‑聚谷氨酸有机肥的方法。该方法包括：首先利用谷氨酸棒杆菌发酵固体有机物产生富含L‑谷氨酸的有机物料，再用枯草芽孢杆菌对含有L‑谷氨酸的有机物料继续发酵产生含有γ‑聚谷氨酸的有机肥。该肥料经过大田试验，取得了良好的作物增产效果。本发明方法避免直接加入纯聚谷氨酸，减少了提纯过程，降低了肥料成本。

主权项

1.一种双微生物发酵制备γ‑聚谷氨酸有机肥的方法，包括如下步骤：(1)制备谷氨酸棒杆菌种子液a、用PDA斜面培养基将谷氨酸棒杆菌菌种活化；所述谷氨酸棒杆菌选用谷氨酸棒杆菌Ⅲ型(Corynebacterium glutamicum)，中国工业微生物菌种保藏管理中心的CICC10111、CICC10112、CICC10113或CICC10114；b、按质量份，取葡萄糖30份，玉米粉60份，蛋白胨2份，酵母粉2份，磷酸二氢钾1.5份，硫酸镁1份，氯化钠2份，水1000份，pH值7.0，0.11兆帕压力下灭菌30分钟，制成液体培养基A；将步骤a活化后的谷氨酸棒杆菌接入制成的液体培养基A中，于28～32℃、150转/分钟的摇瓶中培养16～20小时；得谷氨酸棒杆菌种子液；种子液菌活1×108个/克～5×108个/克；备用；(2)制备枯草芽孢杆菌种子液a、用PDA斜面培养基将枯草芽孢杆菌菌种活化；所述枯草芽孢杆菌菌种选用枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)，中国工业微生物菌种保藏管理中心的CICC20643；b、按质量份，取葡萄糖20份，玉米粉30份，蛋白胨5份，酵母粉5份，磷酸二氢钾1份，硫酸镁1份，氯化钠2份，水1000份，pH值7.0，在0.11兆帕压力下灭菌30分钟，制成液体培养基B；将步骤a活化后的枯草芽孢杆菌接入制成的液体培养基B中，于28～30℃、150转/分钟的摇瓶中培养20～24小时；得枯草芽孢杆菌种子液；种子液菌活1×108个/克～5×108个/克；备用；(3)制备发酵有机物料按质量份，取食用菌培养料废渣30～45份，粉碎的作物秸杆15～30份,糠醛渣18～50份,堆置发酵30～40天，加入土豆粉5～10份,常规灭菌，得发酵有机物料；备用；(4)谷氨酸棒杆菌的固体发酵按质量份，取步骤(3)制备的发酵有机物料，按5～10wt％的接种量接入步骤(1)制备的谷氨酸棒杆菌种子液，混匀，调整混合物的含水量至58％～60％，于28～35℃条件下堆置发酵28～40小时，中间翻堆一次，得谷氨酸棒杆菌发酵物；(5)取步骤(4)制备的谷氨酸棒杆菌发酵物，按6～15wt％的接种量接入步骤(2)制备的枯草芽孢杆菌种子液，混匀，于25～35℃条件下堆置发酵25～35小时，中间翻堆一次，发酵结束后烘干或凉干；即得。