[发明专利]外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达方法有效
| 申请号： | 201510701208.0 | 申请日： | 2015-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN105177039B | 公开（公告）日： | 2020-04-21 |
| 发明（设计）人： | 王艳敏;杨传平;王玉成;张春蕊;张一鸣;王超;梁福生 | 申请（专利权）人： | 东北林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/00 |
| 代理公司： | 哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 何强 |
| 地址： | 150040 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达方法，它涉及一种外源基因转入白桦苗的方法。本发明提供了一种外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达方法。方法：一、Tween无菌水溶液震荡清洗，然后放入高渗液中浸泡；二、转化培养基中侵染浸泡；三、用甘露醇和二硫苏糖醇的混合液震荡洗涤，然后吸干水分栽种到土壤中。本发明方法为更有效的分析白桦抗逆基因及启动子功能研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 转入 白桦 实生苗 瞬时 表达 方法 | ||
【主权项】：
外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达方法，其特征在于按以下步骤实现外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达：一、将白桦苗用浓度为0.5ml/L的Tween无菌水溶液震荡清洗2min，然后放入高渗液中浸泡10min；二、将经过高渗液浸泡的白桦苗放入转化培养基，在转速为120r/min的条件下侵染浸泡4h；三、将侵染后的白桦苗用甘露醇和二硫苏糖醇的混合液震荡洗涤2次，然后用无菌滤纸吸干水分，再栽种到土壤中，覆膜保湿3天后获得瞬时转化子，即实现外源基因转入白桦实生苗的瞬时表达；其中，步骤一中高渗液为含有250g/L蔗糖的1/4MS培养基；步骤二中转化培养基为1/2MS+AS 100μM+甘露醇100mM+KT 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖50g/L+Tween200.1ml/L+农杆菌，转化培养基OD值为0.6～1.0；步骤三甘露醇和二硫苏糖醇混合液中甘露醇的浓度为170mM、二硫苏糖醇的浓度为1mM。
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