[发明专利]一种用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球及其制备方法，其酶活性为40‑60U/mg。其制备方法是先将慈菇胰蛋白酶抑制剂溶于pH7～9的缓冲液中得到蛋白酶缓冲液，再将其加入到经过活化的磁性壳聚糖微球中，水浴振荡偶联4～7h后得到偶联慈菇胰蛋白酶抑制剂的磁性壳聚糖微球；再将其加入蚯蚓纤溶酶粗酶溶液在30‑60℃恒温水浴摇床中振荡固化反应0.5‑3h；反应结束后，反复洗涤至洗涤液中检测不出蛋白为止，磁铁分离收集即可得到用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球。本发明以慈菇胰蛋白酶抑制剂为配基，与磁性微球偶联，运用用于蚯蚓纤溶酶的分离纯化，提高了蚯蚓纤溶酶的分离纯化选择性，而且磁性微球易于与蚯蚓纤溶酶分离。

主权项

1.一种用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：磁性壳聚糖微球的偶联：将慈菇胰蛋白酶抑制剂溶于pH 7~9的缓冲液中得到蛋白酶缓冲液，再将其加入到经过活化的磁性壳聚糖微球中，水浴振荡偶联4~7 h， 振荡温度为30‑60℃，得到偶联慈菇胰蛋白酶抑制剂的磁性壳聚糖微球；蚯蚓纤溶酶的固定化：再将偶联慈菇胰蛋白酶抑制剂的磁性壳聚糖微球加入蚯蚓纤溶酶粗酶溶液在30‑60 ℃恒温水浴摇床中振荡固化反应0.5‑3 h；反应结束后,用去离子水和pH为6‑8的磷酸缓冲液反复洗涤固定化蚯蚓纤溶酶的磁性壳聚糖微球粗品,至洗涤液中检测不出蛋白为止,磁铁分离收集即可得到用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球，其酶活性为40‑60 U/mg，在pH 6.5~8.0之间的稳定性能保持在78%以上，储藏时间在30天内用于蚯蚓纤溶酶固定化的磁性微球的酶活性为82%以上。