[发明专利]一种兔耳兰叶片组织培养快速繁殖方法

摘要

一种兔耳兰叶片组织培养快速繁育方法，包括如下步骤(1)取兔耳兰无菌试管苗的嫩叶作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导培养，得到无菌试管苗；(3)将无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行快速繁育培养，获得丛生芽；(4)将丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养，获得健壮植株；(5)将健壮植株置于1/2MS生根培养基中进行生根培养，获得完整带根苗；(6)将完整带根苗在室温为25℃环境下炼苗4‑7天，移栽到灭过菌的椰糠基质中。采用本发明能够在短时间内提供成活率高的兔耳兰优质种苗，有效解决兔耳兰的规模化育苗问题。

主权项

一种兔耳兰叶片组织培养快速繁育方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取兔耳兰新萌发的嫩叶作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100mL0.1％升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导与获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀划破叶片表面，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养40d，得到无菌试管苗，其中MS诱导培养基为MS基本培养基中加入6‑BA1.0‑5.0mg/L、NAA0.5‑2.0mg/L、TDZ0.5‑2.0mg/L、PVP2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，培养基的pH值5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁育培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23‑27℃、光照强度1500lux，光照时间8‑10h/d的条件下培养40d，得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入TDZ0.5‑2.0mg/L、NAA0.5‑1.0mg/L、KT0.1‑0.5mg/L、PVP2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，培养基pH值5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间8‑10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入NAA0.1‑0.5mg/L、6‑BA0.5‑5.0mg/L、PVP2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，培养基pH值5.8；(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23‑27℃、光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30d，得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入NAA0.5‑1.0mg/L、香蕉泥50g/L、蔗糖10g/L和琼脂5g/L，培养基pH值5.8；(6)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加30mL自来水，炼苗4‑7天，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，移栽到灭菌过的椰糠基质中。