[发明专利]一种蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制多肽及其制备方法和应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制多肽及其制备方法和应用。一种蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制多肽，其是从蚕蛹蛋白水解液中分离得到的血管紧张素转换酶抑制肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的蚕蛹蛋白源血管紧张素转化酶抑制多肽具有结构新颖，分子量小，降血压活性高等特点，为治疗高血压的食品、药物和保健品的开发利用开辟了一条全新的途径，具有非常广泛的应用前景。

主权项

1.一种蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其特征在于，所述的蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制多肽的制备方法，包括如下步骤：(1)将冷冻蚕蛹按照1:3的比例加入到蒸馏水中，匀浆搅拌1h后过滤，重复3次；合并滤液，滤液在100℃水浴条件下加热30min至蛋白变性，再调节pH为3.0使蛋白沉降，蛋白溶液在4℃条件下静置12h，使蛋白充分沉淀与溶液分层，随后高速冷冻离心4℃、8000r/min离心45min去除上清液，收集沉淀，干燥，即得到蚕蛹粗蛋白粉；(2)将蚕蛹粗蛋白粉按照质量比1:50加入到蒸馏水中，完全溶解，然后加入1.5％的中性蛋白酶，在pH为7.0，温度为50℃条件下进行酶解，酶解时间为3h；酶解完成后在90℃水浴灭活10min，水解液离心后取上清液；用截留分子量为5KDa超滤膜过滤，将超滤透过液冷冻干燥，得到冻干粉末；(3)将步骤(2)中得到的冻干粉末溶解在浓度为0.01mol/L，pH为8.5的磷酸盐缓冲液中；以1.0mL/min的速度上样于平衡好的阴离子交换树脂色谱柱，用磷酸盐缓冲液洗柱至在220nm处吸收峰回到基线，洗脱流速为1.0mL/min；用NaCl溶液对样品进行梯度洗脱，洗脱流速为1.0mL/min，洗脱梯度为0‑1.0mg/mL；按照时间段收集各个组分进行冷冻干燥并检测活性，在‑20℃条件下保存；(4)将步骤(3)中活性最好的冻干粉末上样于平衡好的Sephadex G‑15凝胶色谱柱，以水为流动相进行洗脱，洗脱流速为1.0mL/min；检测波长为280nm；按照时间段收集各个组分进行冷冻干燥并检测活性，在‑20℃条件下保存；(5)将步骤(4)中活性最好的冻干粉末溶解在超纯水中，进行反相高效液相色谱分离，流动相，A相：含0.1％三氟乙酸的纯水；B相：乙腈；检测波长为220nm，分段收集各个组分进行冷冻干燥并检测活性，在‑20℃条件下保存；(6)将步骤(5)得到的活性最好的冻干粉末再次经过反相高效液相色谱分离，流动相，A相：含0.1％三氟乙酸的纯水；B相：乙腈；检测波长为220nm，收集保留时间为17.5‑18.5min的组分进行冷冻干燥，即得血管紧张素转换酶抑制多肽。