[发明专利]大熊猫抗病毒潜力检测的I类MHC基因的特异性引物及分型方法

摘要

本发明公开了一种大熊猫抗病毒潜力检测的I类MHC基因的特异性引物及分型方法。特异性引物序列如序列表所示，大熊猫I类MHC区域Aime-C、Aime-F、Aime-I及Aime-L基因二号及三号外显子的分型方法是采用所述扩增方法的产物，用单链构象多态性对目标片断进行基因分型。I类MHC负责结合及呈递病毒抗原，从而激发相应免疫反应，本发明有利于正确进行大熊猫I类MHC基因分型和基因多态性分析，因此能帮助我们进一步研究与病毒引起的疾病有关的特定等位基因、评估大熊猫抗病能力，对更全面和科学地设计大熊猫保育计划有重要意义。

主权项

用于扩增大熊猫I类MHC区域Aime‑C、Aime‑F、Aime‑I及Aime‑L基因二号及三号外显子的特异性引物组，其特征在于包括十一对引物对，所述引物对的核苷酸序列如下所示：引物对一：上游引物yyE2B1:TCAGCCCCTCCGCGCCCGCAG；下游引物yyE2B2:GACCCGGGCCGCGTCGCTCAC；引物对二：上游引物1611H2F:ATGACGTATTTCTACACCGGC；下游引物1R:TCCATTTTCCCTTCCTGGTGGG；引物对三：上游引物152E2A3:GCCCTGCTCTCCCCCACTCAG；下游引物152E2A4:CGGGGGTTCCTGAGAGTTGGGGC；引物对四：上游引物152E3A1:AGTCCGAGCGTTGCCCCAACTCTC；下游引物152E3A2:AGTAATGGCCCTGAGTAAGGTTTC；引物对五：上游引物128E22F:CCTGCTCTCCCCAACGCG；下游引物128E22R:GTCACAGCCGTGCATCCA；引物对六：上游引物128E31F:CCGAGTGGACTTGCAGACCGCC；下游引物128E32R:GTCCGGGGTTTCTGAAGAAGAACG；引物对七：上游引物1300E22F:GGGAGAAGGGTCGGGCGGGAC；下游引物1300E21R:AGGTCACAGCCGTGCATCTC；引物对八：上游引物1300E32F:GCTCTCACACCATCCAGGA；下游引物1300E31R:GTCGGGGGTTTCTGAAGAAGAATC；引物对九：上游引物yySE23F:CGCCCGCAGGCTCGCACTCC；下游引物yySE22R:GCAGGATGTTCAGGCTCT；引物对十：上游引物152E3B1:TCGCCTCCTGTCGGGCGGGGCCAG；下游引物152E3B2:AGCCAGCCCCAGCGGAGGGG；引物对十一：上游引物1300E32F:GCTCTCACACCATCCAGGA；下游引物152E3B2:AGCCAGCCCCAGCGGAGGGG；其中，引物对一、引物对三、引物对五及引物对七分别为Aime‑C、Aime‑F、Aime‑I及Aime‑L二号外显子巢式PCR外侧引物；引物对九为Aime‑C二号外显子巢式PCR内侧引物，而引物对一为Aime‑F、Aime‑I及Aime‑L二号外显子共同的巢式PCR内侧引物；引物对二、引物对四、引物对六及引物对八分别为Aime‑C、Aime‑F、Aime‑I及Aime‑L三号外显子巢式PCR外侧引物；引物对十一为Aime‑L二号外显子巢式PCR内侧引物，而引物对十为Aime‑F、Aime‑I及Aime‑C三号外显子共同的巢式PCR内侧引物。