[发明专利]一种饲用缓释固定化纤维素酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种饲用缓释固定化纤维素酶的制备方法，属于纤维素酶制备领域。本发明纤维素酶是取明胶与去离子水、葡萄糖水溶液和聚乙二醇水溶液混合，再与甘油、冰醋酸溶液、交联剂混合成缓释包膜材料备用；再取甘露醇、胰蛋白胨、酵母和琼脂混合，调节pH值，制得产气荚膜梭菌培养基，接种产气荚膜梭菌培养，将产气荚膜梭菌接种在菜麸饼制得的菜麸饼葡萄糖溶液中，密封培养后，打开通入空气，将含产气荚膜梭菌的菜麸饼颗粒蒸发至干，与备用的缓释包膜材料混合于模具中压制，干燥制得。本发明的有益效果是：本发明制备成本比传统方法降低了18%，生产效率高，纤维素酶酶活力提高了42%，酶活性大于9250IU/g。

主权项

一种饲用缓释固定化纤维素酶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按质量比1:30，将明胶加入去离子水中进行溶解，对其升温至50～60℃后，在1200～1500r/min下，搅拌形成明胶溶液，随后按重量份数计，分别选取上述30～40份明胶溶液，10～30份0.6mol/L的葡萄糖水溶液和30～60份0.9mol/L的聚乙二醇水溶液进行混合，对其升温至50～60℃，保温搅拌5～10min，制备得明胶混合液；（2）待搅拌完成后，按重量份数计，选取30～65份明胶混合液20～30份甘油和15～40份冰醋酸溶液，缓慢搅拌混合，混合速度为300～500r/min，待上述溶液混合完成后，按质量比1:25，将交联剂添加至上述混合溶液中，使其交联形成缓释包膜材料，备用，所述的交联剂为过氧化二异丙苯和2，5‑二甲基‑2，5 二叔丁基过氧化己烷，按质量比1:1配比混合而成；（3）按重量份数计，选取20～65份的甘露醇、5～15份的胰蛋白胨、15～20份的酵母和20～45份的琼脂，搅拌混合形成培养基，加入去离子水调节pH为5.0～5.5，待调节完pH后，对其升温至120℃，使其灭菌10～20min制得产气荚膜梭菌培养基，随后按接种比10％，将产气荚膜梭菌接种至产气荚膜梭菌培养基中，在36.5～37.5℃下静置培养12～16h，备用；（4）选取新鲜菜麸饼，将其置于80～90℃烘箱中干燥10～12h，随后将其取出进行碾磨并过筛，制备得80～100目大小的菜麸饼颗粒，随后按质量比1:5，将菜麸饼颗粒分散于质量分数为30%的葡萄糖溶液中，对其搅拌分散均匀后，将上述培养的产气荚膜梭菌按接种比10％，接种至菜麸饼葡萄糖溶液中，使其密封培养3～5天；（5）待产气荚膜梭菌开始分解菜麸饼颗粒后，将其打开通入空气，待产气荚膜梭菌死亡后，对其旋转蒸发至干，收集含产气荚膜梭菌的菜麸饼颗粒，按质量比1:1，将收集的菜麸饼颗粒与步骤（2）制备的缓释包膜材料搅拌混合并置于模具中进行压制，随后将其置于30～40℃下干燥成膜，即可制备得一种饲用缓释固定化纤维素酶。