[发明专利]细菌无痕遗传操作载体及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201510744940.6 | 申请日： | 2015-11-05 |
| 公开（公告）号： | CN106676119B | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 温廷益;邓爱华;吴杰;商秀玲;白桦;张芸;梁勇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/65;C12N1/20;C12N1/21 |
| 代理公司： | 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙) 11446 | 代理人： | 武玉琴;刘国伟 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种细菌无痕遗传操作载体，所述载体包括抗毒素开关控制的毒素反筛元件和抗生素抗性基因。还提供了该载体的构建方法及应用该载体进行细菌无痕基因敲除、敲入、替换、点突变及大片段DNA插入和删除(大于194kb)的方法。本发明利用组成型启动子持续表达毒素蛋白，并利用诱导型启动子诱导表达抗毒素蛋白，建立了抗毒素开关控制的毒素反筛元件(TCCRAS)，解决了现有革兰氏阳性菌的遗传操作系统特异性不高、系统不稳定且筛选困难的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 细菌 遗传 操作 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis或谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum无痕遗传操作载体，其特征在于，所述载体包括抗毒素开关控制的毒素反筛元件和抗生素抗性基因，所述抗毒素开关控制的毒素反筛元件包括抗毒素蛋白编码基因、诱导表达抗毒素蛋白编码基因的诱导型启动子、毒素蛋白编码基因和持续表达毒素蛋白编码基因的组成型启动子，所述毒素蛋白‑抗毒素蛋白为RelE‑RelB或MazF‑MazE。
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