[发明专利]基于金丝桃素与1-芘丁酸作用的DNA荧光分析方法

摘要

本发明公开了一种基于金丝桃素与1‑芘丁酸之间π‑π堆积作用的DNA荧光分析方法，将共价连接到链霉亲和素磁珠表面的吗啉寡核苷酸作为捕获探针，与目标DNA片段杂交后，利用锆离子的配位作用，将1‑芘丁酸连接到DNA骨架上，再用金丝桃素与1‑芘丁酸之间的π‑π堆积作用引入荧光较强的金丝桃素。本发明通过过渡金属离子的配位作用及芳香环之间的π‑π堆积作用引入荧光探针，方法简便，荧光探针结合效果好，测得的荧光强度与目标DNA呈相关关系，通过荧光分析的方法实现对DNA片段的高灵敏度、高选择性检测，可应用于分子识别、临床诊断、环境监测及食品安全等领域中DNA样品的检测。

主权项

1.一种DNA荧光分析方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将链霉亲和素磁珠悬浮在PBS缓冲液中，加入3’端修饰生物素的吗啉寡核苷酸探针，反应结束后进行磁分离，并用PBS缓冲液清洗多次；步骤二、加入待测DNA片段溶液，杂交反应结束后进行磁分离，并用Tris‑HCl缓冲液清洗多次；步骤三、加入ZrOCl2溶液，配位反应结束后进行磁分离，并用60wt％乙醇清洗多次；步骤四、加入1‑芘丁酸溶液，反应结束后进行磁分离，并用N,N‑二甲基甲酰胺清洗多次；步骤五、再加入金丝桃素溶液，反应结束后进行磁分离,并用二甲基亚砜清洗多次，最后复悬在DMSO中测紫外和荧光光谱。