[发明专利]一种治理黑臭河道的微生物菌液制备方法

摘要

一种治理黑臭河道的微生物菌液制备方法，其特点是，包括以下步骤：采集河道底泥，通过高通量测序实验进行底泥微生物群落多样性分析，初期筛选，取河道底泥，接种于无菌脱氮菌富集培养液中，接入新鲜的富集培养液中，检测培养基中氨氮、硝酸盐氮含量，取氮类积累少的混合菌液作为初筛的具有脱氮作用的菌群；优化富集筛选，向新鲜的优化富集培养基接入初期筛选的优势脱氮菌液，在混合菌液中加入微量元素溶液，将加入微量元素的混合菌液接种于碳酸钙和柠檬酸钠为碳源的液体培养基中，混合菌液制成均匀的繁殖稀释液，并接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，使其均匀分布于平板中，进行培养。

主权项

一种治理黑臭河道的微生物菌液制备方法，其特征在于，包括以下步骤 ：  (1) 采集河道底泥，通过高通量测序实验进行底泥微生物群落多样性分析，高通量测序流程包括对底泥DNA提取、PCR扩增和产物纯化、Miseq上机测序；   (2) 初期筛选，取河道底泥5~10g，接种于无菌脱氮菌富集培养液中，置于30℃培养箱中静置培养，培养3~4d，接入新鲜的富集培养液中，扩大培养三次，获得优势菌群初步筛选，检测培养基中氨氮、硝酸盐氮含量，取氮类积累少的混合菌液作为初筛的具有脱氮作用的菌群；   (3) 优化富集筛选，向新鲜的优化富集培养基接入初期筛选的优势脱氮菌液，置于30~35℃生化培养箱中培养，如此反复富集培养，直到获得优势混合脱氮菌液，   (4) 在混合菌液中加入微量元素溶液，所述微量元素溶液包括ZnSO4·7H2O浓度3.93g/L、CaCl2浓度为5.5g/L、MnSO4·H2O浓度为4.32g/L、FeSO4·7H2O浓度5.0g/L、(NH4)6Mo7O2·4H2O浓度1.1g/L、CuSO4·5H2O浓度1.57g/L；CoCl2·6H2O浓度1.61g/L；   (5) 将加入微量元素的混合菌液接种于碳酸钙和柠檬酸钠为碳源的液体培养基中，碳源浓度为3g/L,设置温度为30~35℃，进行培养，得到混合菌液；   (6) 混合菌液制成均匀的繁殖稀释液，并接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，使其均匀分布于平板中，进行培养。