[发明专利]一种蛇足石杉无菌苗的快速繁育方法

摘要

本发明公布了一种蛇足石杉无菌苗快速繁殖的方法，包括芽胞采集与处理、外植体表面消毒、内生菌杀灭培养与芽胞萌发、幼苗的继代与增殖、试管苗驯化等步骤。以蛇足石杉芽胞为外植体，经低温处理，芽胞的萌发率显著提高，达到98%；同时，该发明方法采取芽胞灭菌与萌发、幼苗增殖与生根同步化操作，大大缩短了产苗周期，降低了生产成本；所获芽胞污染率低、萌发率高、繁殖速度快，移栽存活率达96%以上，这对可持续性开发利用蛇足石杉野生资源、缓解石杉碱甲市场的供需矛盾及实现蛇足石杉的规模工厂化育苗，具有十分积极的意义。

主权项

一种蛇足石杉无菌苗的快速繁育方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）芽胞的采集与处理：采集饱满、无病虫害的蛇足石杉的芽胞，流水冲洗0.5‑1小时，然后于4℃条件下低温保湿保存与处理3‑4周；（2）外植体表面消毒：将经低温保湿保存处理的芽胞于超净工作台中，无菌水清洗2‑3遍，无菌纸吸干表面水分；然后浸泡于70%乙醇中30‑60秒，无菌水清洗3‑5遍；最后置于5%的次氯酸钠溶液中消毒8‑10分钟，无菌水清洗3‑5遍；（3）内生菌杀灭培养与芽胞萌发：经表面灭菌的外植体转移至添加苯菌灵可湿粉DW50的改良Moore’s液体培养基中，于20‑23℃、光照强度500‑1000lx、光照时间12‑14h/d条件下培养3‑4周；（4） 幼苗的继代与增殖：将已灭菌的外植体转至以苔藓为基质，添加改良Moore’s培养液以及0.015‑0.045mg/l IBA，0.3‑0.9mg/l KT，0.25‑0.75mg/l NAA的植物激素组合体系中，于20‑23℃、光照时间12‑14h/d、相对湿度70‑90%、光照强度 1000‑3000lx 条件下培养，每两个月更换一次培养基；（5）试管苗的驯化培养：将种植基质先用苯菌灵稀溶液灭菌，再在阳光下暴晒处理8h；取继代增殖培养2次的试管苗开瓶盖驯化一周后，洗净根部培养液，移植到经消毒灭菌处理过的种植基质上，大棚培养1‑2个月，即可获得驯化苗，以备大田移栽。