[发明专利]一种用于检测肿瘤突变的双标签接头序列及检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测肿瘤突变的双标签接头序列，其特征在于，所述接头序列由接头引物P5和接头引物P7合成，其中接头引物P5为SEQ ID NO：1所示序列，接头引物P7为SEQ ID NO：2所示序列。本发明还提供了建库方法和测序方法。利用本发明的双标签接头，可以准确检测1×10‑5肿瘤突变率，有效提高肿瘤突变检测的灵敏度，结合高通量测序的通量，一次测序可以检测多个基因的多个突变位点。

主权项

一种用于检测肿瘤突变的双标签接头序列，其特征在于，所述接头序列由接头引物P5和接头引物P7合成，其中接头引物P5为SEQ ID NO：1通过I5index序列连接SEQ ID NO：2所得序列所示，接头引物P7为FFFFFEEEEEDDDDDNNNNNNNNNNNN依次连接在SEQ ID NO：3的5’端SEQ ID NO：3再通过I7index序列连接SEQ ID NO：4所得序列所示；SEQ ID NO：1：AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC；SEQ ID NO：2：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT；SEQ ID NO：3：AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC；SEQ ID NO：4：ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG；所述FFFFF为酶切位点保护碱基，EEEEE为酶切位点，DDDDD为定位标签序列，NNNNNNNNNNNN为随机分子标签序列；FFFFF、DDDDD、EEEEE包括但不限于5个相同碱基，I7index序列为6‑8个碱基；NNNNNNNNNNNN为4或6或8或12个随机碱基，且没有四个连续相同的碱基；优选的，NNNNNNNNNNNN表示为BDHVBDHVBDHV，其中B表示该位置是除A外的碱基，D位置表示该位置是除C外的碱基，H表示该位置是除G外的碱基，V表示该位置是除T外的碱基。