[发明专利]一种精确定量检测转基因玉米品系T25的试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201510755454.4 | 申请日： | 2015-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN105255874B | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 魏海燕;张锡全;汪万春;曾静;徐蕾蕊;马丹;魏咏新 | 申请（专利权）人： | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 赵晓丹;张文祎 |
| 地址： | 100026*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种精确定量检测转基因玉米品系T25的试剂盒及检测方法。具体地，本发明涉及一组用于检测转基因玉米品系T25的引物和探针，其具有序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，及含有这些引物和探针的试剂盒。本发明还提供了一种利用双重微滴式数字PCR技术精确定量检测转基因玉米品系T25的检测方法，该方法无需依赖有证标准物质或其他标准品，具有更高的精确度、灵敏性和重复性，易于标准化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 精确 定量 检测 转基因 玉米 品系 t25 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
1.一种精确定量检测转基因玉米品系T25的检测方法，其特征在于，该方法包括：（1）提取待测样品DNA；（2）配制双重ddPCR反应体系，其中，所述反应体系包括序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：3所示的用于扩增外源基因pat‑T35S的引物和探针，以及序列表中SEQ ID NO：4至SEQ ID NO：6所示的用于扩增内源基因zein的引物和探针；序列表SEQ ID No.3所示的用于扩增外源基因pat‑T35S的探针5’端标记HEX，3’端标记BHQ；序列表SEQ ID No.6所示的用于扩增内源基因zein的探针5’端标记FAM，3’端标记BHQ；（3）将步骤（2）配制的双重ddPCR反应体系和微滴生成油加入微滴生成卡中，置于微滴生成仪中生成微滴；（4）将步骤（3）生成的微滴转移至96孔板中，进行扩增反应；反应条件为![]()
（5）结果判定：按照泊松分布原理计算获得玉米内、外源基因的拷贝数，进而通过如下公式计算获得转基因玉米T25的百分含量：![]()
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