[发明专利]一种桑叶有效成分的统筹提取方法

摘要

本发明涉及一种桑叶有效成分的统筹提取方法，是以桑叶为原料，依次经超声醇提、水提获得醇提液、水提液和提取后滤渣，其中醇提液经浓缩、萃取脱色后，使用阴阳离子交换树脂富集、洗脱制得桑叶黄酮和DNJ，脱除的色素经皂化、铜代、成盐后制得叶绿素铜钠盐；水提液经浓缩后醇沉、澄清剂澄清分离蛋白、多糖，多糖喷雾干燥制得桑叶多糖，蛋白加入酶水解，制成小分子低聚肽；提取后残渣经超声酸碱洗涤，乙醇浸泡脱脂后制得桑叶膳食纤维；通过统筹工艺，将桑叶“一站”式完全分解，制成6种主要产品，充分利用桑叶中的有效成分，提高附加值，相较于单一物质提取存在巨大利润空间和经济价值，具有良好的商业前景，适用于大规模工业化生产。

主权项

一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征是包括以下步骤：(1)将桑叶粉与乙醇‑水溶液混合均匀，并在30‑50℃条件下超声萃取后，离心分离得滤渣C1和醇提滤液A1；(2)将所述滤渣C1与乙醇‑水溶液混合均匀，在30‑50℃条件下超声萃取后离心分离得滤渣C2和滤液A2；(3)合并醇提滤液A1和滤液A2，得滤液A3；(4)将滤渣C2减压蒸发脱去乙醇后，与水混合均匀，在40‑60℃条件下超声萃取，离心分离得滤渣C3和滤液B1；(5)再将滤渣C3与水混合均匀，在40‑60℃条件下超声萃取，离心分离得滤渣C4和滤液B2；(6)合并滤液B1和滤液B2，并浓缩至原体积的1/10‑1/20，得浓缩液B3；(7)滤渣C4依次用碱液和酸液在加热和高速搅拌及超声条件下处理，离心过滤；滤出的酸洗后滤渣经漂白和去残余脂溶性物后制备得到高溶胀性膳食纤维；所述高溶胀性膳食纤维的溶胀性≥9.0ml/g，持水率≥250％；(8)在所述浓缩液B3中加入乙醇，于2‑4℃下沉淀6‑8h，过滤得滤渣C5；(9)所述滤渣C5用去离子水重新溶解，并依次加入ZTC1+1澄清剂A和B组分，在45‑55℃下，每隔20‑30min搅拌一次，保温5‑6h，过滤得粗多糖滤液T1和蛋白滤渣D1；(10)粗多糖滤液T1经喷雾干燥，即得桑叶粗多糖；(11)将蛋白滤渣D1加去离子水配置成悬浮液，加入Alcalase蛋白酶，调节pH＝7‑7.5,在45‑50℃水解4‑5小时；将水解液灭除酶活性冷却至室温后再加入Papain蛋白酶，调节pH＝6‑6.5，在30‑35℃水解2‑3h，过滤得蛋白水解液D2；将蛋白水解液D2灭除酶活性后冷却至室温过大孔树脂，流出的过柱液冷冻干燥，得桑叶低聚肽；(12)将所述滤液A3在温度50‑70℃真空度0.06‑0.08MPa下减压浓缩到原体积的1/10‑1/20，形成色素糊浆的水状液，经低速离心分离，得到色素糊浆和离心分离掉的下层液体；取离心分离掉的下层液体与石油醚按1～2:1的体积比混合，萃取2‑4次，至石油醚层基本无颜色即完成脱色过程，得下层萃余液A4和萃取的上层色素液；在萃取的色素液中加入0.2‑0.5w/w％碳酸钠溶液，经旋转蒸发回收石油醚后，与所述色素糊浆合并为混合色素糊浆S1；(13)所述混合色素糊浆S1制成桑叶叶绿素铜钠盐产品的具体步骤如下：(a)将所述混合色素糊浆S1置于乙醇水溶液、丙酮、氢氧化钠水溶液和石油醚的混合溶剂中，调节水层pH值至11～12，在温度45～50℃下，搅拌皂化反应30～45min；所述混合溶剂中，乙醇水溶液、丙酮、氢氧化钠水溶液和石油醚的体积比为5～10:8～10:5～7:15～20；所述混合色素糊浆S1与乙醇水溶液的质量体积比为1:10～15；(b)分离除去上层的石油醚层液，留用下层的碱水层液；(c)将所述碱水层液浓缩至原体积的1/2～1/3，冷却至室温，即得含水溶性叶绿素的混合液；(d)将所述含水溶性叶绿素的混合液加入稀盐酸调节pH值至5～7，加入饱和硫酸铜溶液，加热铜代，过滤后得铜代母液；(e)所述铜代母液加入稀盐酸调节pH值至2.0～2.2，静置结晶后过滤得滤渣；(f)将所述滤渣分别通过如下三次次洗涤过程：①用50～60℃去离子水淋洗1～2次，滗去水液；②用30～40v/v％的乙醇水溶液淋洗1～2次，至乙醇层刚出现绿色，滗去溶液；③用石油醚淋洗1～2次，至石油醚层刚出现绿色，滗去溶液，抽滤得滤饼；(g)将所述滤饼溶解于丙酮中，再加入氢氧化钠乙醇溶液调节pH值至11～12，然后重结晶；(h)经重结晶所得结晶物加稀盐酸调节pH值至7～8，去除漂浮物后，在小于105℃条件下干燥，冷却至常温粉碎得到叶绿素铜钠盐产品；(14)将所述下层萃余液A4用阳离子交换树脂吸附，纯净水洗柱，收集水洗液H1，H1浓缩后真空干燥，得桑叶阳离子黄酮产品；(15)将步骤(14)中吸附后的阳离子交换树脂再用氨水洗脱，收集氨水洗脱液浓缩到原体积的1/3‑1/5，得Z1；Z1上阴离子交换树脂吸附，纯净水洗柱，收集水洗液Y1；再用50‑70v/v％乙醇对已水洗后的阴离子树脂洗脱，收集乙醇洗脱液H2，将H2浓缩后真空干燥，得桑叶阴离子黄酮产品；(16)将所述水洗液Y1制备桑叶1‑脱氧野尻霉素产品，具体步骤如下：a)将所述水洗液Y1浓缩，通过1:10‑20(W/W)硅胶湿法拌样硅胶层析柱，利用甲醇‑乙酸乙酯或甲醇‑丙酮为展开剂梯度洗脱；梯度洗脱时，用不同比例但成分相同的展开剂；共分5次洗脱，5次洗脱展开剂的成分配比为：甲醇与乙酸乙酯或丙酮的配比依次为5:95(v/v)、10:90(v/v)、15:85(v/v)、20:80(v/v)和25:75(v/v)；每次洗脱的展开剂用液量为：第一次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的0.8‑1.5倍；第二次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的1.6‑3倍；第三次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的6.4‑12倍；第四次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的6.4‑12倍；第五次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的3.2‑6倍；b)分别收集不同时间内流出物，经气相色谱硅烷化法或薄层色谱法检测流出物1‑脱氧野尻霉素含量，将得到的流出物编为两组，一组含量在50‑70wt％间，另一组为大于80wt％，分别在真空度0.06‑0.08MPa，温度50‑55℃下干燥，得两种高含量的桑叶1‑脱氧野尻霉素产品。