[发明专利]一种用于大肠杆菌基因敲入的负筛选标记在审
| 申请号： | 201510760227.0 | 申请日： | 2015-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN105238820A | 公开（公告）日： | 2016-01-13 |
| 发明（设计）人： | 尚广东;张青 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/65;C12N15/70;C12N15/66;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210046 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于大肠杆菌基因敲入的负筛选标记，即plac启动子驱动的毒性基因ccdB。plac-ccdB和庆大霉素抗性基因aacC1组成用于基因敲入的基因盒。第一步扩增得到含同源臂plac-ccdB-aacC1的DNA片段，电转化至表达重组酶的大肠杆菌。在庆大霉素筛选之下，重组酶催化同源重组而将此DNA片段整合至大肠杆菌基因组。第二步利用相同的同源臂扩增外源DNA片段，电转化表达重组酶的第一步所得菌株，在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷筛选之下，ccdB表达，其毒性作为负筛选标记的特征，重组酶催化同源臂之间的同源重组，外源DNA片段取代plac-ccdB-aacC1基因盒而实现基因敲入。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 大肠杆菌 基因 筛选 标记 | ||
【主权项】：
plac启动子驱动的毒性基因ccdB作为大肠杆菌基因敲入的负筛选标记的应用。
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