[发明专利]一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法

摘要

一种菠萝蜜的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)选取生长健壮的菠萝蜜的嫩芽，剪成带2～3个芽的节段，进行消毒处理；(2)将消毒后外植体置于WPM基本培养基中诱导发芽，得到无菌试管苗；(3)将所述试管苗置于WPM繁殖培养基中快速繁殖培养，获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于WPM壮苗培养基中进行壮苗培养，获得健壮植株；(5)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中进行生根培养，得到完整带根苗；(6)取完整带根苗进行炼苗，然后移植到沙床生长一个月，移栽到大田。采用本发明所述的培养方法得到的丛生芽增殖系数为30～40倍，获得组培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了菠萝蜜工厂化育苗的问题。

主权项

一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法，其特点在于，该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取菠萝蜜的嫩芽作外植体，依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15～20min，添加100mg/L吐温‑20的2～3滴的0.1v/v％升汞消毒8～10min，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水分，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)茎段萌动，获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22～26℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d的条件下培养25d，芽萌动后获得无菌试管苗，其中WPM培养基中添加6‑BA0.1～0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于WPM繁殖培养基中在温度为22～26℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽，其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 0.1～1.0mg/L、矮壮素0.1～0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基的pH为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22～26℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6‑BA 0.5～1.5mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8；(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22～26℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基中添加NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8；(6)炼苗与移栽：向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面角质形成后取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。