[发明专利]一种克百威氨基化半抗原的合成方法及应用

摘要

本发明“一种克百威氨基化半抗原的合成方法及应用”，涉及生物化工技术。本发明是新型的克百威氨基化半抗原合成方法，合成步骤简洁有效，得率高，避免了克百威羧基化半抗原制备中传统三光气合成方法大量使用光气和甲苯的危害性。以呋喃酚为起始原料，通过酯化及胺解、Boc保护和脱保护反应，引入一条含3个碳和氨基端的手臂链，形成氨基化半抗原。采用戊二醛法使半抗原和载体蛋白上的氨基进行缩合，最大程度暴露克百威抗原决定簇，免疫动物实验表明本发明制备的人工抗原具有良好免疫原性。本发明的半抗原及人工抗原可完全用于克百威免疫分析中，满足国内对克百威残留的检测需要，应用前景广阔。

主权项

一种克百威氨基化半抗原的合成方法，其特征是以呋喃酚为原料，通过酯化、胺解及Boc保护和脱保护反应，最终合成克百威氨基化半抗原，具体合成路线如下：本发明目标化合物的合成方法分为以下步骤：（1） 取一定量的呋喃酚溶于50mL 二氯甲烷（DCM）中，冰浴下加入三乙胺（Et₃N），搅拌10分钟后，将二（对硝基苯）碳酸酯溶于15mL二氯甲烷中，缓慢滴加到上述反应体系中，控制反应摩尔比为呋喃酚：二（对硝基苯）碳酸酯=1:1；逐渐升温至30℃，继续搅拌反应1小时，TLC板监控反应完成，展开剂为石油醚：乙酸乙酯=10:1，合成中间产物（II）；（2） 称取一定量经三乙胺碱化的3‑叔丁氧羰基氨基丙胺（与呋喃酚摩尔比为1:1），溶于10mL二氯甲烷中，在冰浴条件下加入到上述反应液中，将温度升到室温并继续搅拌过夜；依次用50mL水和饱和食盐水各洗涤2次；用无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液经真空旋干后经200‑300目硅胶柱层析纯化得到中间产物（III），洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯，体积比为12:1，收率为65%；（3）将步骤2得到的半抗原中间产物（III）溶于5mL 1,4‑二氧六环中，冰浴下加入15mL盐酸二氧六环，室温反应4小时后将析出固体用30mL石油醚洗涤3次，再以石油醚混合固体，经真空旋干除去水分，得到终产物（IV），收率为67%。