[发明专利]一种地枫皮的离体保存方法

摘要

一种地枫皮的离体保存方法，包括如下步骤：(1)选取地枫皮无菌苗，(2)将地枫皮无菌苗接种到MS、1/2MS、B5、WPM四种培养基上，考察无机盐水平对地枫皮试管苗离体保存的影响；(3)将地枫皮无菌苗接种到添加矮壮素CCC、多效唑PP₃₃₃、脱落酸ABA的培养基上，考察各生长抑制剂对地枫皮无菌苗离体保存的影响；(4)将地枫皮无菌苗接种到以琼脂、蔗糖、山梨醇的3个水平设计正交试验培养基上，考察各渗透压对地枫皮无菌苗离体保存的影响；(5)将生长健壮的地枫皮无菌苗单芽切下接种到最佳保存培养基上保存300d后存活的地枫皮无菌苗接种到花宝1号+IAA0.2mg/L繁殖培养基上恢复生长，对第3次继代培养的材料进行芽增殖倍数考察。同时是将第3次培养所得的丛生芽单切接入生根培养基1/2MS+IAA1.0mg/L中进行生根状况调查。本发明找到了能够长时间保存地枫皮试管苗的培养基和控制技术条件。

主权项

一种地枫皮的离体保存方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)选取地枫皮试管苗在繁殖培养基上培养30d获得的丛生芽作为试验材料；(2)将步骤(1)获得的丛生芽分别接种到MS、1/2MS、B5、WPM四种培养基上，以实验材料存活率不低于50％的保存时间作为种质保存的评价指标，接种10瓶，每瓶5株单芽，四种培养基中分别添加30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为6.0，培养温度25±1℃，光强1600lx，光照12‑14h/d；(3)将步骤(1)获得的丛生芽接种到添加不同浓度矮壮素CCC、脱落酸ABA、多效唑PP₃₃₃的培养基上，以实验材料存活率不低于50％的保存时间作为种质保存的评价指标，接种10瓶，每瓶5株单芽，矮壮素CCC、脱落酸ABA、多效唑PP₃₃₃培养基中分别添加30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为6.0，培养温度25±1℃，光强1600lx，光照12‑14h/d；(4)将步骤(1)获得的丛生芽接种到以琼脂、蔗糖、山梨醇3个水平设计正交试验培养基上，以实验材料存活率不低于50％的保存时间作为种质保存的评价指标，接种10瓶，每瓶5株单芽，培养基的pH值为6.0，培养温度25±1℃，光强1600lx，光照12‑14h/d；(5)将生长健壮的地枫皮无菌苗单芽切下接种到最佳保存培养基上保存300d后存活的地枫皮无菌苗接种到花宝1号+IAA0.2mg/L繁殖培养基上恢复生长，对第3次继代培养的材料进行芽增殖倍数考察，同时是将第3次培养所得的丛生芽单切接入生根培养基1/2MS+IAA1.0mg/L中进行生根状况调查。