[发明专利]一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法与应用

摘要

本发明公开了一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法与应用。本发明利用双歧杆菌所产生的β‑葡萄糖苷酶将人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CK，转化率为62‑68％。所转化的稀有人参皂苷CK由于极性低，易被人体吸收，易于通过血液循环进入肝脏完成代谢而发挥独特的药理作用。双歧杆菌是可食用的益生菌，所产的糖苷酶有较高的催化活力、选择性和稳定性，利用双歧杆菌产生的β‑葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK具有得率高、副产物少、安全可靠、无污染和容易工业化生产等优点。本发明的成本较低，操作简单，转化周期短。本发明利用双歧杆菌产生的β‑葡萄糖苷酶在制备稀有人参皂苷CK方面有着重要的应用价值。

主权项

1.一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：通过β‑葡萄糖苷酶实现转化，所述的β‑葡萄糖苷酶来自B.breve ATCC 15700双歧杆菌；包括以下步骤：（1）将双歧杆菌菌株厌氧培养24‑48h后；超声波破碎细胞后离心，20‑30℃条件下，上清液中加入硫酸铵至饱和度为10%‑50%，调pH为4.5‑4.6，4‑8℃静置6‑8h；离心，弃去上清液，将蛋白沉淀加入醋酸－醋酸钠缓冲液中溶解，得到含β‑葡萄糖苷酶的粗酶液；（2）含β‑葡萄糖苷酶的粗酶液用凝胶过滤柱层析纯化，重复2~10次，分离得到β‑葡萄糖苷酶；（3）将人参皂苷Rb1溶于甲醇中，再与醋酸‑醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL的人参皂苷Rb1底物溶液，将步骤（2）所得β‑葡萄糖苷酶配制成20U/mL的酶液，再将人参皂苷Rb1底物溶液与β‑葡萄糖苷酶液按照体积比为（10‑50）:1的比例混合，pH4‑5，35‑55℃条件下反应24‑48h，然后置于80‑100℃水浴中灭活15‑20min，室温条件下8000‑10000rpm离心5‑10min，取上清液在50‑60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。