[发明专利]一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质

摘要

本发明公开了一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质，其具体经保存液的配制、基质预处理、混悬液的配制、标准物质的制备及菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得含菌数为530±24 CFU/瓶的成品。所得含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质具有良好的均匀性，可解决现有标准物质中鸡肉基质难溶于水的问题，且其品质稳定、质量可控，适用于微生物高效、准确的定量检测。

主权项

一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：1）保存液的配制：将志贺氏菌标准菌株冻干粉用志贺氏菌增菌肉汤溶解后，划线接种于志贺氏菌显色培养基上，36±1℃下培养20h‑48h；然后挑取单菌落接种于志贺氏菌增菌肉汤中，41.5±1℃下培养16h‑20h；吸取菌液于无菌离心管中，加入其体积1.5倍、质量浓度为40%的无菌甘油，混合，制成保存液；2）基质预处理：将鸡肉剔除脂肪组织后，冷冻干燥至脱水率为75%，然后将脱水鸡肉粉碎至组织细度为170目，采用⁶⁰Coγ辐射灭菌后分装备用；3）混悬液的配制：按1g鸡肉基质加入7mL无菌水的比例，将预处理后的鸡肉基质与水混合成基质悬液，再加入其3倍体积的保护剂，混合制得混悬液；4）标准物质的制备：取步骤1）制备的保存液2 μL于200 mL志贺氏菌增菌肉汤中，41.5±1 ℃下进行培养，并利用多功能酶标仪定时取样测定培养液的OD_600 nm值，当OD_600 nm为0.270±0.1时停止培养，得新鲜菌液，然后将新鲜菌液按混悬液体积浓度1%加入到步骤3）制得的混悬液中，于恒温振荡器上300r/min摇匀30min，再按2mL/瓶进行分装，其含菌量为8.4×10²~2.5×10³CFU/mL，最后经冷冻干燥，制得标准物质；5）检验：将所得标准物质进行菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得成品；步骤3）所述保护剂是将脱脂乳、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、酪氨酸与水按体积比4:0.1:1:0.2:1混合而成；步骤4）经冷冻干燥后所得标准物质中含菌量为530±24 CFU/瓶。