[发明专利]引物对、制备细胞周期因子Y的方法及其应用

摘要

本发明公开了引物对、制备细胞周期因子Y的方法以及用于检测细胞周期因子Y抗体的试剂盒和方法，其中，引物对具有SEQ ID NO：1和2所示的核苷酸序列。利用本发明的引物对扩增细胞周期因子Y的编码基因，进而合成细胞周期因子Y，并利用细胞周期因子Y包被试剂板得到固相载体，制备检测血清中细胞周期因子Y抗体试剂盒，或检测血清中细胞周期因子Y抗体。本发明的试剂盒和检测方法，灵敏度高、准确性好、成本低，操作简单，可应用于血清和血浆中细胞周期因子Y抗体的检测。

主权项

1.一种用于检测细胞周期因子Y抗体的试剂盒，其特征在于，包括：固相载体，所述固相载体上携带有细胞周期因子；辣根酶标记抗体；辣根酶标记抗体稀释液；洗涤浓缩液；底物显色液；以及终止液；所述辣根酶标记抗体的成份：0.2μg/ml辣根酶标记的羊抗人免疫球蛋白G溶液和0.2μg/ml辣根酶标记的羊抗兔免疫球蛋白G溶液；所述辣根酶标记抗体稀释液的成份：基于20ml所述辣根酶标记抗体稀释液，含有0.05‑0.15g的NaCl，0.002‑0.008g的KCl，0.002‑0.008g的KH2PO4和0.02‑0.05g的Na2HPO4；所述洗涤浓缩液的成份：基于20ml所述洗涤浓缩液，含有1‑3g的NaCl，0.05‑0.15g的KCl，0.05‑0.15g的KH2PO4，0.5‑1.0g的Na2HPO4和200‑600μl的吐温‑20；所述底物显色液包括底物显色液A和底物显色液B，其中，所述底物显色液A的成份：基于5ml所述底物显色液A，含有0.10‑0.15g的醋酸钠，0.01‑0.02g的柠檬酸和1‑5μl体积百分浓度为30％的H2O2；所述底物显色液B的成份：基于5ml所述底物显色液B，含有0.001‑0.003g的EDTA‑钠盐，0.005‑0.015g的柠檬酸，0.3‑0.8ml的丙三醇和0.001‑0.003g的四甲基联苯胺；以及所述终止液的成份：1‑3mol/L H2SO4溶液；进一步包括：标准品，所述标准品为识别所述细胞周期因子Y的多克隆抗体，所述多克隆抗体为兔源性多克隆抗体；和标准品稀释液，所述标准品稀释液的成份为：基于20ml所述标准品稀释液，含有0.08‑0.12g的NaCl，0.002‑0.008g的KCl，0.002‑0.008g的KH2PO4和0.02‑0.5g的Na2HPO4；所述细胞周期因子通过如下方法制备得到：采用引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，以A549肺腺癌细胞的cDNA为模板，扩增细胞周期因子Y编码基因；将所得到的细胞周期因子Y编码基因亚克隆至质粒中，以便获得重组质粒；利用所述重组质粒转化大肠杆菌，并对所得到的转化后的大肠杆菌进行培养，其中，在所述培养过程中通过添加IPTG诱导所述细胞周期因子Y的表达；以及纯化所述细胞周期因子Y。