[发明专利]利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序的方法

摘要

本发明涉及一种荧光切换性质荧光团的核苷酸分子进行测序的方法，这种方法降低了背景信号，提高了获得信号的准确性。更进一步，本发明将荧光切换测序和混合核苷酸分子测序技术联合使用，提供了数据冗余和校验的特性。其特殊的信号获得方式和获得效率，使得其在基因测序方向有很大的应用前景。

主权项

1.一种利用具有荧光切换性质荧光团的核苷酸底物分子进行测序的方法，其特征在于：利用5’ 末端磷酸修饰有荧光切换性质的荧光团的核苷酸底物分子进行测序；所述的荧光切换性质指的是测序后荧光信号相比测序反应前有明显改变；首先，将待测的核苷酸序列片段固定，然后通入含有核苷酸底物分子的反应液；使用酶将核苷酸底物上面的荧光团释放，从而导致荧光切换；每轮测序使用一套反应液组，每套反应液组包括两个反应液，每个反应液包含A、G、C、T核苷酸底物分子中的两种，或者每个反应液包含A、G、C、U核苷酸分子中的两种；将待测的核苷酸序列片段固定，通入一套反应液组中的一个反应液；检测、记录荧光信息；将同一反应液组中的另一个反应液依次通入，并且每次检测、记录荧光信息；其中，所述反应液组中，每个反应液包含两种不同的核苷酸分子；其中，所述的荧光团，指的是具有荧光素，DDAO，resorufin结构的荧光团；核苷酸底物分子指的是具有4‑8个磷酸分子的核苷酸；用三套不同碱基组合的反应液组进行三轮测序，利用三轮测序间的互信息，进行错误校验；通入反应液之后，将进行反应的反应室封闭，然后检测、记录荧光信息；在低温下进入反应液，然后加热到酶反应温度，再检测荧光信号。