[发明专利]一种海南地区白花油茶组培苗的生产方法

摘要

本发明属植物组培技术领域，涉及一种海南地区白花油茶组培苗的生产方法，是取开花后170～190d发育时期的油茶果实幼胚子叶作为外植体，经脱分化诱导出结节胚性组织、增殖培养、再分化培养得到体细胞胚，将体细胞胚转接至植株再生诱导培养基上诱导得到具健壮胚芽和主根的体细胞胚再生植株。本发明利用组织培养，选择花后180d油茶果发育时期的种子未成熟胚子叶为外植体进行油茶组培快繁，建立一整套经体细胞胚发生途径获得油茶再生植株的体系，为海南地区白花油茶工厂化育苗提供技术依据，并为海南地区白花油茶的基因工程改良奠定了材料和技术基础。

主权项

一种海南地区白花油茶组培苗的生产方法，其特征在于，包括外植体选择、初代培养、继代培养和植株再生的过程，其具体过程如下：1)、外植体选择取开花后170～190d发育时期的油茶果实进行消毒后解剖刀切开，剖开胚乳，夹取幼胚子叶，切成薄片，备用；2)、初代培养将胚子叶薄片平铺接种在初代培养基上诱导培养，培养温度23～27℃，每天光照13～16h，光照强度为1500～2000lx；每25d继代一次，直至外植体脱分化诱导出结节胚性愈伤组织；所述初代培养基是以改良MS为基本培养基，并添加Kt 2.0mg·L^‑1、NAA 0.2mg·L^‑1、Zt 5.0mg·L^‑1、椰汁5％、蔗糖30g·L^‑1和植物凝胶2.2g·L^‑1，pH5.5；3)、继代培养将结节胚性组织接种到增殖培养基上进行增殖培养，诱导胚性组织增殖，每25d继代一次，30～40d增殖系数约4.7～5.0；将增殖后的胚性组织转接到再分化培养基上诱导体细胞胚发生，40～50d后即可再分化出体细胞胚；所述增殖培养基是以改良MS为基本培养基，并添加Kt 1.0～2.0mg·L^‑1、NAA 0.2mg·L^‑1、椰汁10％、蔗糖30g·L^‑1和植物凝胶2.2g·L^‑1，pH5.5；所述再分化培养基是以改良MS为基本培养基，并添加Kt 0.7mg·L^‑1、NAA 0.1mg·L^‑1、ABA 0.05mg·L^‑1、椰汁10％、水解酪蛋白400mg·L^‑1、植物凝胶2.3g·L^‑1和0.1％活性炭，pH5.5；4)、植株再生待子叶形体细胞胚成熟后，单独剔剥下来，转接至植株再生诱导培养基上诱导植株再生，30～40d后形成具健壮胚芽和主根的体细胞胚再生植株；所述植株再生诱导培养基是以改良MS为基本培养基，并添加Kt 0.35mg·L^‑1、NAA 0.05mg·L^‑1、水解酪蛋白200mg·L^‑1、蔗糖30g·L^‑1、植物凝胶2.3g·L^‑1和0.1％活性炭，pH5.5。所述改良MS是将大量元素降低至2/3，并将MS的有机成份改成B₅有机成份。