[发明专利]一种苏氨酸脱氨酶活性包涵体的制备及其应用有效
| 申请号： | 201510818842.2 | 申请日： | 2015-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN105296455B | 公开（公告）日： | 2020-02-14 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;张冬竹;章晖;周俊平;杨套伟;张显;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 安徽华恒生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 32228 无锡华源专利商标事务所(普通合伙) | 代理人： | 聂汉钦 |
| 地址： | 230000*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明是一种苏氨酸脱氨酶活性包涵体的制备及其应用。本发明在于：成功得到了一株可以产苏氨酸脱氨酶活性包涵体的重组工程菌，苏氨酸脱氨酶活性包涵体易于分离及重复利用，性质稳定，在不同的使用环境及使用一段时间后依然可以保持较高的酶活，且可以积累101.6g/Lα‑酮丁酸，有效的解除了产物α‑酮丁酸的反馈抑制作用。为α‑酮丁酸及α‑氨基丁酸的制备过程中的问题提供了有效的技术解决方案。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 苏氨酸 脱氨酶 活性 包涵 制备 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种苏氨酸脱氨酶活性包涵体制备α-酮丁酸的方法，其特征包括以下内容：/n(1)根据苏氨酸脱氨酶C端调控区域的氨基酸系列减少6个氨基酸，设计1对引物以改造苏氨酸脱氨酶的C端；所述引物为P1/P2：/nP1：5’-ACCGGGATCCATGGCTGACTCGCAACCCCT-3’，BamHI；/nP2：5’-CCCAAGCTTTTACCTGAACGCCGGGTTATT-3’，HindIII；/n构建好1株重组大肠杆菌pET-28a-td18-BL21；将重组菌利用超声波细胞破碎仪破碎；/n(2)离心取沉淀并利用pH7.5的50mMPB缓冲液悬浮起来即得到苏氨酸脱氨酶活性包涵体；/n(3)将获得的活性包涵体用pH7.5的50mMPB缓冲液洗涤两次，再加入pH6.0-8.0的50mMPB缓冲液或pH8.0-10.0的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液重悬，然后于30-42℃不同温度下加入底物L-苏氨酸，通过加入一定浓度的氨水或氢氧化钠溶液控制pH在6.0-10.0之间，以HPLC检测底物α-酮丁酸的产率。/n
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