[发明专利]沉默TNFAIP8基因的方法及其在肿瘤治疗中的应用有效
| 申请号： | 201510830193.8 | 申请日： | 2015-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN105296539B | 公开（公告）日： | 2018-10-30 |
| 发明（设计）人： | 柴立辉;马远方;吴素霞;张赛男;杨菲;李伟华;冯世明;顿国庆;刘广超 | 申请（专利权）人： | 河南大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/12;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 时立新 |
| 地址： | 475001*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种沉默TNFAIP8基因的方法及其在肿瘤治疗中提高顺铂(CDDP)治疗效果的应用。沉默TNFAIP8基因的方法具体包括：设计siRNA靶序列、设计并合成shRNA基因序列、退火处理形成双链、与LV10载体连接、转化293T细胞制备慢病毒颗粒等步骤。将该方法沉默肿瘤细胞中的TNFAIP8基因后，可提高肿瘤细胞对CDDP的敏感性。本发明可有针对性地降低肿瘤细胞中TNFAIP8基因表达量；进一步地对TNFAIP8基因沉默的肿瘤细胞应用CDDP治疗时，肿瘤细胞对CDDP敏感性得到了明显提升。 | ||
| 搜索关键词： | 沉默 tnfaip8 基因 方法 及其 肿瘤 治疗 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种沉默TNFAIP8基因的慢病毒颗粒，其特征在于，通过如下步骤构建获得为：（1）设计沉默TNFAIP8基因的siRNA靶序列；使人TNFAIP8基因沉默的siRNA靶序列，如SEQ ID.1所示，具体为：siRNA靶序列为：5’‑ GCCACCACCTTAATAGACGAC ‑ 3’；依据siRNA靶序列设计并合成shRNA基因序列，如SEQ ID.2所示，具体序列如下：正义链序列为： 5’‑TGCCACCACCTTAATAGACGACTTCAAGAGAGTCGTCTATTAAGGTGGTGGCTTTTTTC‑ 3’；反义链序列为：5’‑TCGAGAAAAAAGCCACCACCTTAATAGACGACTCTCTTGAAGTCGTCTATTAAGGTGGTGGCA‑ 3’；（2）将上述步骤（1）中所合成的shRNA基因的正义链序列和反义链序列进行退火处理形成双链；（3）对LV10载体采用XhoI酶和 Hpa I 酶进行线性化处理；（4）将步骤（2）和步骤（3）产物进行连接构建LV10‑shRNA载体；（5）将步骤（4）所构建的LV10‑shRNA载体转化293T细胞制备慢病毒颗粒。
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